Quantification de neurones nouvellement générés dans le tissu cérébral d’un rat à l’aide de la technique du fractionneur optique

Prenez des tranches de cerveau d’hippocampe d’un rat injecté avec de la bromodéoxyuridine, ou BrdU, un analogue nucléosidique de la thymidine.

BrdU s’intègre dans l’ADN pendant la division cellulaire, marquant les neurones nouvellement générés dans le gyrus denté, une région pour la neurogenèse.

Incuber avec un agent oxydant pour inactiver les enzymes peroxydases endogènes.

Traitez avec de l’acide pour dénaturer l’ADN et exposer BrdU, puis neutralisez l’acide.

Incuber avec un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires et une solution bloquante pour masquer les sites de liaison non spécifiques.

Incuber avec des anticorps primaires ciblant BrdU, suivis d’anticorps secondaires marqués à la peroxydase spécifiques aux anticorps primaires.

Introduisez un substrat chromogène et un agent oxydant, permettant à la peroxydase de convertir le substrat en un résidu coloré.

Montez le tissu et contre-colorez avec un colorant liant les acides nucléiques.

Déshydratez le tissu, puis traitez-le pour augmenter la transparence.

Au microscope, identifiez le gyrus denté.

À l’aide de la technique du fractionneur optique, analysez plusieurs plans sur l’épaisseur du tissu pour quantifier les neurones mar