Imagerie en direct de l’œil de la chrysalide de la drosophile à l’aide de la microscopie à fluorescence

Commencez par une chrysalide de drosophile transgénique avec un œil exposé.

Placez la chrysalide sur une perle de gelée à l’intérieur d’un cadre en papier hydraté, entourée d’un anneau de gelée.

L’œil de la chrysalide contient des protéines de jonction marquées à la GFP qui mettent en évidence les limites cellulaires dans le neuroépithélium de l’œil en développement.

Appuyez doucement une lamelle sur la région de l’œil de la nymphe.

Au microscope fluorescent, les jonctions marquées GFP deviennent fluorescentes, montrant l’organisation du neuroépithélium.

Prenez des images à intervalles réguliers à différentes profondeurs et traitez-les pour améliorer le contraste et minimiser le bruit de fond.

Alignez ces images avec des intervalles de temps croissants pour suivre le développement du neuroépithélium.

Initialement, les cellules primaires forment des limites autour des amas de cellules photoréceptrices, tandis que les cellules interommatidiennes ou CI s’organisent en une seule couche.

Plus tard, les CI se différencient en cellules secondaires et tertiaires à proximité des photorécepteurs.

Enfin, les CI en excès sont éliminés par la mort cellulaire programmée, formant un réseau hexagonal qui