Surveillance de la récupération de cellules interneuromastiques ablatées au laser chez le poisson-zèbre à l’aide de la microscopie confocale

Commençons avec une larve de poisson-zèbre contenant des cellules interneuromastiques (INMC) marquées par fluorescence, montées sur une lamelle et placées sous un microscope confocal.

Les INMC sont des cellules progénitrices dotées d’une capacité de régénération qui ont déjà été soumises à une ablation au laser.

Tout d’abord, observez la zone endommagée en mode fluorescence. L’absence de fluorescence confirme la réussite de l’ablation laser.

Ensuite, utilisez le mode d’imagerie en lumière transmise pour examiner la zone endommagée où la cellule apparaît granuleuse et gonflée de noyaux irréguliers, confirmant ainsi la mort cellulaire.

Le recrutement de macrophages sur le site indique une réponse cellulaire active aux lésions.

Maintenant, repassez en mode fluorescence et capturez des images en accéléré à intervalles réguliers pour surveiller la récupération.

Pendant la phase de récupération, les INMC étendent les projections dans l’espace, facilitant la fermeture et favorisant la réparation cellulaire.

Enregistrez ces images de séries chronologiques pour l’analyse. La réapparition d’une fluorescence distincte dans la zone ablée confirme la réussite de la récupération cellulaire.

Pour l’imagerie des corps cellulaires après l’ablation, dans le menu Canaux, décliquez sur la piste DAPI pour désactiver le laser d’ablation et ouvrez le menu du mode d’acquisition. Cliquez sur Zoom et réduisez le zoom à 0,7.

Pour évaluer le succès de l’ablation cellulaire, balayez rapidement le champ de vision. En utilisant les mêmes paramètres que ceux de l’imagerie de préablation, capturez et enregistrez une image de post-ablation. Inspectez l’image du canal du tube photomultiplicateur en lumière transmise pour confirmer davantage les dommages cellulaires. Les cellules endommagées présenteront un aspect granuleux et les noyaux gonfleront fréquemment ou apparaîtront de forme irrégulière.

Pour évaluer la récupération du corps de la cellule après l’ablation, activez à la fois la position de la scène et les options de temps pour la capture d’images en accéléré, et réglez les paramètres temporels sur le point de temps expérimental approprié et des intervalles de 15 minutes. Démarrez ensuite l’expérience pour acquérir des images et enregistrez le fichier résultant une fois terminé.