Imagerie calcique in vitro dans des cultures d’hippocampes de rats à court et à long terme
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:41 min • May 29th, 2025
Prenez une culture neuronale d’hippocampe de rat à court terme représentant de jeunes neurones et une culture à long terme représentant des neurones âgés.
Les neurones âgés présentent une densité plus élevée de canaux calciques voltage-dépendants de type L, ou L-VGCC, qui restent ouverts plus longtemps lors de la dépolarisation membranaire.
Incuber à l’aide d’un indicateur de calcium fluorescent qui se diffuse dans les cellules, puis laver pour éliminer tout excès de colorant.
Placez les cultures dans une chambre de perfusion sous un microscope à fluorescence.
Introduire une solution contenant des neurotransmetteurs qui se lient aux récepteurs des neurones, induisant l’afflux d’ions sodium et déclenchant la dépolarisation membranaire.
La dépolarisation active les L-VGCC, permettant l’afflux de calcium dans le cytoplasme.
Dans la culture à long terme, la densité plus élevée et l’ouverture prolongée des L-VGCC entraînent une surcharge en calcium, une caractéristique du vieillissement neuronal.
La liaison du calcium à l’indicateur génère de la fluorescence, les neurones âgés présentant une intensité de fluorescence plus élevée, reflétant une augmentation des niveaux de calcium intracellulair
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