Imagerie des plaques bêta-amyloïdes dans des coupes de tissus cérébraux par immunomarquage et coloration à la curcumine

Commencer par des coupes cérébrales à partir d’un modèle de souris neurodégénérative.

Incuber avec une solution de blocage complétée par un détergent pour augmenter la perméabilité des tissus et bloquer la liaison non spécifique. Jetez la solution.

Introduire des anticorps primaires ciblant les plaques bêta-amyloïdes. Incuber avec agitation pour que les anticorps interagissent avec les plaques bêta-amyloïdes, puis laver.

Ajoutez des anticorps secondaires marqués d’un fluorophore rouge et incubez dans l’obscurité pour permettre aux anticorps d’interagir.

Laver pour éliminer les anticorps non liés, suivi d’un lavage à l’alcool.

Ajoutez de la curcumine, qui lie les amyloïdes riches en bêta-feuilles avec une affinité élevée, puis lavez.

Ensuite, traitez avec des concentrations d’alcool croissantes, déshydratant les sections du cerveau. Ajoutez du xylène pour éliminer toute trace de réactifs.

Montez une section sur une lame et observez au microscope à fluorescence.

Utilisez un laser de longueur d’onde de 590 nanomètres pour exciter les fluorophores rouges sur les anticorps secondaires. Capturez l’image.

Passez à un laser de longueur d’onde de 480 nanomètres pour exciter la curcumine, émettant