Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Prenez une section de cerveau épaisse fixe d’une souris infectée par le virus de la rage.
Le virus infecte les neurones et se réplique, ce qui entraîne la présence de protéines virales dans les cellules.
Traiter avec un détergent pour perméabiliser les membranes cellulaires et une solution bloquante pour masquer les sites de liaison non spécifiques.
Incuber avec des anticorps primaires ciblant les protéines virales, suivis d’anticorps secondaires conjugués aux fluorophores qui se lient aux anticorps primaires.
Traiter avec un colorant fluorescent liant l’acide nucléique pour marquer le noyau.
Déshydratez le tissu à des concentrations d’alcool croissantes, puis appliquez une solution éclaircissante pour augmenter la transparence du tissu pour l’imagerie.
Montez la section dans une chambre d’imagerie, remplissez-la de solution éclaircissante et scellez-la.
À l’aide de la microscopie confocale à balayage laser, imagez le tissu séparément à l’aide des marqueurs fluorescents, puis fusionnez-les pour créer une image bidimensionnelle.
Acquérez des images à différents plans focaux sur le tissu et combinez-les pour générer une représentation tridimensionnelle permettant d’évaluer la progression de
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