Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 5:40 min • May 29th, 2025
Prenez un segment de tissu chimiquement fixé et nettoyé d’un embryon de souris transgénique exprimant la protéine fluorescente verte (GFP) dans les motoneurones de la colonne vertébrale.
Montez le tissu verticalement sur une pointe de pipette modifiée.
Fixez l’extrémité à un capillaire fixé à l’intérieur du microscope à fluorescence à feuillet de lumière.
Placez une chambre d’échantillonnage remplie de tampon sous le tissu pour l’immerger et éliminer les débris.
À l’aide d’un logiciel d’imagerie, alignez le tissu sur le trajet de la lumière.
La
source lumineuse émet une mince couche de lumière laser, provoquant des GFP dans un seul plan du tissu pour émettre de la fluorescence.
Un détecteur positionné perpendiculairement au trajet de la lumière capte la fluorescence émise.
Acquérir des images des motoneurones de la colonne vertébrale pour générer une reconstruction 3D de la morphologie des branches axonales.
Utilisez un logiciel pour cartographier les axones, identifier les modèles de ramification et les points d’extrémité afin d’évaluer la croissance et la connectivité des motoneurones.
Configurez des optiques d’éclairage 5X/0.1 et des optiques de détection 5X/0.16. Assemblez le porte-éch
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