Analyse des cellules immunitaires dans les tissus nerveux de souris à l’aide de la cytométrie en flux

Incuber avec des

anticorps marqués au fluorophore contre CD45 et CD11b, et avec des anticorps marqués à la biotine contre le CMH de classe II, pour marquer les cellules immunitaires.

Incuber avec de la streptavidine marquée au fluorophore qui se lie à la biotine.

Traiter avec un fixateur pour stabiliser la structure cellulaire.

Introduire un tampon de perméabilisation avec une coloration fluorescente à l’ADN pour perméabiliser les membranes et marquer les noyaux.

À l’aide d’un cytomètre en flux, faites passer les cellules à travers le faisceau laser pour évaluer les caractéristiques optiques et de fluorescence.

Retirez les agrégats avec une fluorescence d’ADN plus élevée pour isoler les cellules individuelles et détecter la fluorescence des marqueurs.

Identifier les cellules exprimant CD45, un marqueur caractéristique des cellules immunitaires, en confirmant leur présence.

La plupart des cellules CD45 positives de la DRG expriment CD11b et CMH de classe II, indiquant des cellules de type microglie, qui sont absentes dans les nerfs sciatiques.

Cette technique complète l’imagerie pour l’analyse de l’hétérogénéité des cellules immunitaires au sein des tissus nerveux.

Sur l’ordinateur, sélecti