Imagerie en accéléré de la migration radiale des neurones corticaux dans des tranches de cerveau embryonnaire de souris transduites

Prenez un insert membranaire contenant des tranches de cerveau organotypiques embryonnaires de souris transduits, où les neurones et les cellules gliales radiales expriment des protéines fluorescentes, permettant leur visualisation.

À l’aide de la microscopie à fluorescence, sélectionnez une tranche avec des neurones corticaux fluorescents migrant radialement vers la surface piale de la tranche à l’aide d’échafaudages gliaux radiaux intacts.

Transférez l’insert à membrane avec la tranche sélectionnée dans une parabole à fond de verre avec un support pour soutenir l’activité cellulaire pendant l’imagerie.

Placez la boîte dans la chambre climatisée du microscope confocal inversé pour assurer la viabilité cellulaire.

Ajustez les paramètres d’imagerie pour capturer des images claires tout en minimisant les dommages photo.

Ensuite, configurez une pile Z dans la région ciblée pour visualiser les structures cellulaires.

Lancez l’imagerie en accéléré à intervalles réguliers.

Analysez les images pour évaluer la migration radiale des neurones corticaux de la zone sous-ventriculaire vers la plaque corticale le long des échafaudages gliaux radiaux, en mettant en évidence les modèles de migration neuronale.

Sélectionnez une tranche de cerveau pour l’imagerie en observant les tranches à l’aide d’un microscope inversé. Choisissez une tranche avec des neurones uniques brillants dans la SVZ supérieure, migrant radialement vers la surface piale de la tranche.

La présence de fins processus fluorescents de cellules gliales radiales qui s’étendent sur toute la plaque corticale indique un échafaudage glial radial intact, qui est utilisé par les neurones corticaux en migration.

Transférez l’insert à membrane avec une tranche sélectionnée dans un plat à fond en verre de 50 millimètres de diamètre contenant 2 millilitres de milieu de culture en tranches. Placez la parabole dans la chambre climatique du microscope confocal.

Réglez la résolution sur 512 x 512 pixels. Augmentez la vitesse de balayage de 400 hertz à 700 hertz pour augmenter la fréquence d’images d’environ 1,4 à environ 2,5 images par seconde. N’utilisez pas plus de deux fois la moyenne.

Définissez un empilement Z à travers la région électroporée avec une taille de pas de 1,5 micron. Commencez la série en accéléré en prenant une pile Z toutes les 30 minutes. Les paramètres décrits permettent une résolution et une luminosité suffisantes de l’image tout en maintenant les dommages photographiques faibles lors de l’acquisition.