Ablation sélective au laser d’un seul neurone chez une larve de poisson-zèbre à l’aide d’un microscope confocal

Prenez une solution d’agarose préchauffée contenant une larve de poisson-zèbre transgénique anesthésiée exprimant une protéine fluorescente dans les motoneurones de la colonne vertébrale.

Transférez la larve dans un plat en verre avec un anneau d’agarose.

À l’aide d’un microscope, retournez la larve sur le côté. Ensuite, laissez l’agarose se solidifier, immobilisant la larve.

Ajouter un tampon contenant un anesthésique pour maintenir l’anesthésie.

Placez la parabole sur la platine du microscope confocal et utilisez l’imagerie en fond clair pour localiser la région de la moelle épinière dorsale.

Passez en mode fluorescence pour visualiser les motoneurones fluorescents.

Déterminez le plan z central du soma cellulaire pour un ciblage précis de l’ablation.

Configurez les paramètres d’imagerie pour une acquisition haute résolution tout en minimisant les photodommages.

Une fois que le plan z souhaité est net, effectuez l’ablation sur la région du neurone cible à l’aide d’un laser ultraviolet focalisé.

L’énergie laser perturbe les structures cellulaires, provoquant une perte de fluorescence et la mort cellulaire. La perte de fluorescence irréversible confirme une ablation précise sans affecte