Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:19 min • May 29th, 2025
Commencez par une section de tissu cérébral de souris contenant la région d’intérêt dans un tampon pour maintenir l’hydratation pendant l’imagerie.
Le tissu est obtenu à partir d’un modèle murin de la maladie d’Alzheimer injecté avec du méthoxy X04, un colorant fluorescent.
Methoxy X04 se lie spécifiquement aux structures en feuilles plissées β dans les plaques amyloïdes et conserve sa fluorescence pour l’imagerie et l’analyse.
À l’aide d’un microscope fluorescent avec un filtre UV, excitez le méthoxy-X04 et capturez la fluorescence émise pour visualiser les plaques amyloïdes marquées par fluorescence contre les tissus environnants.
Sans ajuster la platine du microscope, capturez des images de la même région en mode fond clair pour détailler la structure des tissus et en mode fluorescence pour visualiser les plaques.
Alignez les images en fond clair et fluorescentes à l’aide d’un logiciel de traitement d’image pour cartographier avec précision les plaques sur les structures anatomiques.
Ces images fournissent une visualisation détaillée des plaques amyloïdes dans leur contexte structurel pour étudier la pathologie de la maladie d’Alzheimer.
À l’aide d’un atlas stéréotaxique du cerveau de souris, sélectionnez des sections de cerveau contenant la région d’intérêt et placez chaque section dans un cryoprotecteur dans un puits d’une plaque de culture à 24 puits. Ensuite, utilisez une pipette jetable pour ajouter une gouttelette de PBS sur une lame de microscope, puis placez la section sur la gouttelette.
Examinez la coupe au microscope fluorescent pour identifier les régions contenant des plaques A-bêta marquées au méthoxy-X04. Sans déplacer la platine du microscope, capturez des images des régions d’intérêt en fond clair ainsi qu’en mode fluorescence. Chaque image doit montrer la même région dans les deux champs pour corréler la plaque à la région structurelle de la section de tissu.
Enregistrez et nommez les images prises en fonction du numéro d’animal. Notez également le numéro du puits dans la plaque et le champ des photos prises. Remettez la section dans le puits désigné une fois l’imagerie terminée. Examinez la section suivante de la séquence en utilisant la même procédure pour éviter de sécher les sections.
Pour aligner les images, ouvrez les images en fond clair et en champ UV pour le même retour d’intérêt dans l’image J. Ensuite, utilisez le plugin mosaic J pour aligner les bords des deux images. Enregistrez l’image alignée et combinée en fonction du numéro du puits dans un dossier, avec le numéro de l’animal particulier. Combinez les images de différentes sections d’un même animal pour identifier et localiser les plaques dans la région d’intérêt.