Suivi morphologique et physiologique des sphéroïdes tumoraux par tomographie par cohérence optique

Commencez avec une plaque multi-puits contenant des sphéroïdes tumoraux, un agrégat tridimensionnel de cellules cancéreuses.

Placez-le sur une platine d’imagerie par tomographie par cohérence optique, ou OCT, en vous assurant qu’il est stabilisé pour une imagerie précise.

Ajustez l’objectif pour une mise au point optimale de la lumière, définissez les paramètres de balayage et lancez la capture d’image au fil du temps.

Lorsque la lumière interagit avec les cellules, elle se réfléchit à des intensités variables en fonction des structures cellulaires et des profondeurs.

L’OCT capture ces intensités de lumière réfléchie et construit des images en coupe transversale bidimensionnelles à haute résolution dans différents plans.

Déplacez la plaque pour acquérir les images des sphéroïdes tumoraux de tous les puits.

À l’aide d’un logiciel, alignez ces images et traitez-les pour créer un modèle sphéroïde tridimensionnel, révélant ses caractéristiques morphologiques, notamment sa taille, sa forme et sa structure.

Au fil du temps, les cellules du sphéroïde meurent et leurs structures endommagées augmentent la diffusion de la lumière, réduisant ainsi l’intensité de la lumière réfléchie.

Cela différencie les cellules viables des cellules non viables, ce qui permet de surveiller les conditions physiologiques.

Le jour de l’imagerie des sphéroïdes tumoraux, retirez la plaque multi-puits de l’incubateur. Transférez-le sous le système d’imagerie OCT et placez-le sur l’adaptateur de plaque. Pour régler la hauteur de la plaque, déplacez-la dans la direction z de l’étape de translation. Dans le logiciel d’imagerie personnalisé, définissez une plage de balayage OCT souhaitée pour couvrir l’ensemble du sphéroïde tumoral, en fonction de ses stades de développement, et cliquez sur Enregistrer les paramètres pour enregistrer le paramètre.

Ensuite, affichez les aperçus OCT optimisés xz et yz des sphéroïdes tumoraux. Acquérir des images OCT 3D des sphéroïdes tumoraux un par un pour tous les puits de la plaque contenant des sphéroïdes. Pour afficher l’image d’aperçu, cliquez sur le bouton Aperçu. Et pour acquérir l’image OCT, cliquez sur le bouton acquérir. Enregistrez l’ensemble du processus de déplacement d’étape de l’acquisition des données OCT.

- Pour garantir une qualité d’image optimale pour tous les sphéroïdes tumoraux, l’adaptateur de plaque doit être réglé avec précision et le volume moyen doit être le même.

- Utilisez un code de traitement C++ personnalisé pour traiter des ensembles de données OCT 3D de sphéroïdes tumoraux afin de générer des images structurelles OCT. Utilisez des images OCT 2D dans 3 plans de section xy, xz et yz à travers le centroïde du sphéroïde pour générer le collage d’images de sphéroïdes.