Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:27 min • May 29th, 2025
Commençons par une souris anesthésiée atteinte d’encéphalomyélite auto-immune expérimentale ou EAE. Cette condition provoque une inflammation des yeux et du cerveau.
Placez la souris dans un appareil d’imagerie, en alignant le haut du dos au centre.
Couvrez la partie inférieure de la souris avec un chiffon noir pour éviter les interférences de signal provenant de cette région.
Utilisez un logiciel d’imagerie pour enregistrer la position de la souris.
Prenez une seringue remplie d’un réactif contenant le substrat bioluminescent et injectez-la par voie intrapéritonéale dans la souris.
Le réactif circule et pénètre dans le site de l’inflammation, où le substrat interagit avec les enzymes spécifiques de l’inflammation.
La réaction enzyme-substrat produit un signal bioluminescent.
Capturez des images à intervalles réguliers pour surveiller ce signal.
Le nerf optique se trouve près de la surface, ce qui met en évidence la bioluminescence autour des yeux. En revanche, les signaux du cerveau sont faibles car le crâne absorbe la lumière émise.
Sur l’image, le bleu indique une inflammation légère et le rouge indique une inflammation sévère.
Pour effectuer une imagerie in vivo, maintenez les souris sous anesthésie à l’isoflurane de 2 à 2,5 % pendant toutes les procédures d’imagerie. Placez deux souris l’une à côté de l’autre dans l’appareil et positionnez les épines supérieures des souris au centre.
Ensuite, protégez le site d’immunisation avec un chiffon noir. Ouvrez le logiciel de capture d’images et initialisez l’appareil photo. Ensuite, prenez une image de référence pour évaluer le bon positionnement des souris.
Par la suite, utilisez la mise au point B avec une distance de 6,5 centimètres par rapport à l’appareil photo pour capturer toutes les images. Ensuite, mélangez le réactif chimiluminescent prêt à l’emploi à raison de 40 milligrammes par millilitre avant de remplir la seringue. Ensuite, injectez-en 100 microlitres dans les souris par voie intrapéritonéale et capturez les images de bioluminescence 5, 10 et 15 minutes après l’injection.