Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:52 min • May 29th, 2025
Commencez par configurer la lumière d’excitation pour le microscope à deux photons.
Prenez un bébé souris transgénique anesthésié avec une fenêtre d’imagerie circulaire en verre et une plaque frontale implantée dans son crâne.
Les neurones expriment des protéines fluorescentes rouges pour faciliter l’imagerie.
Nettoyez la fenêtre d’imagerie en verre et fixez le chiot sur la platine d’imagerie à deux photons.
Alignez la fenêtre d’imagerie avec l’objectif du microscope en ajustant la tête du chiot.
Utilisez un coussin chauffant pour maintenir la température corporelle du chiot.
Ajustez le débit de l’anesthésique.
Appliquez une goutte d’eau sur la lamelle, puis abaissez la lentille de l’objectif du microscope.
La microscopie à deux photons utilise deux photons de lumière pour activer les protéines fluorescentes, ce qui permet une imagerie neuronale détaillée avec un minimum de bruit de fond et de photoblanchiment.
Capturez des images des neurones à différentes profondeurs pour visualiser leur structure
Enfin, empilez les images pour générer une représentation tridimensionnelle du neurone, y compris leurs projections neuronales, afin d’étudier les changements morphologiques liés à la croissance.
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