Ablation neuronale ciblée par microscopie à deux photons dans un larava de poisson-zèbre

Commencez avec une larve de poisson-zèbre transgénique anesthésiée immobilisée dans de l’agarose et placée dans une boîte de Pétri contenant une solution anesthésique.

Placez-le sous un microscope laser à deux photons, qui utilise deux photons pour une imagerie détaillée.

Concentrez-vous sur les couches supérieure et inférieure du cerveau pour définir les limites de l’imagerie.

Capturez des images à différentes profondeurs pour observer les neurones avant le traitement au laser.

Ajustez la mise au point sur la région d’intérêt et ajustez la taille de l’image pour affiner la mise au point sur les neurones.

Sélectionnez et irradiez les neurones à l’aide du laser à deux photons.

Le laser induit une chaleur localisée, entraînant la mort neuronale avec des dommages minimes aux tissus environnants. Capturez l’image.

Comparez les images avant et après le traitement pour évaluer les changements de fluorescence.

Refocaliser les neurones dans les plans plus profonds et répéter l’irradiation pour traiter tous les neurones de la région d’intérêt.

Capturez à nouveau l’image et comparez-la avec l’image de prétraitement. La perte de fluorescence après le traitement au laser confirme le succès de l’ablatio