Imagerie de cellules vivantes de la migration nucléaire gliale de Muller pendant la régénération rétinienne du poisson-zèbre
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 5:50 min • June 17th, 2025
Commencez par un explant rétinien dorsal incrusté d’agarose d’un poisson-zèbre transgénique, monté dans une boîte fluorescente avec un support.
La rétine présente des lésions des photorécepteurs induites par la lumière et contient des cellules gliales de Muller ou MGC avec des noyaux exprimant la GFP.
Placez la parabole dans une chambre de microscope multiphotonique.
À l’aide d’un éclairage en fond clair, faites la mise au point sur la rétine.
Passez en mode fluorescence pour localiser les MGC.
Configurez une pile z de la couche de cellules ganglionnaires ou GCL à la couche nucléaire externe ou ONL.
Démarrez l’imagerie en direct.
Les photorécepteurs endommagés libèrent du TNF-α, activant les MGC.
Les noyaux MGC migrent à la base de la couche nucléaire interne ou INL pour répliquer leur ADN.
Ensuite, les noyaux migrent apicalement vers l’ONL pour subir une mitose, produisant des progéniteurs neuronaux.
Après la mitose, les noyaux et les progéniteurs de la MGC migrent vers l’INL.
Les progéniteurs prolifèrent, migrent vers le site de la lésion et se différencient en photorécepteurs, permettant la régénération rétinienne.
Analysez les images capturées pour visualiser la migration nucléaire.
Dans l
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