Imagerie en accéléré de cellules du cortex cérébral primaire de souris transfectées

Prenez une plaque multipuits recouverte de polymère contenant des cellules embryonnaires du cortex cérébral primaire de souris, telles que des cellules progénitrices et neuronales. Les cellules progénitrices sont transfectées pour exprimer des protéines fluorescentes à des fins de marquage et de suivi.

Transférez la plaque dans la chambre d’incubation préchauffée d’un microscope à fluorescence inversée pour un environnement d’imagerie stable.

Localisez la position de référence sur la plaque pour des emplacements d’imagerie cohérents.

Sélectionnez plusieurs champs d’imagerie par puits à un grossissement plus élevé pour maximiser la probabilité d’observer des cellules transfectées.

À intervalles réguliers, capturez simultanément des images en contraste de phase pour révéler la morphologie et la dynamique cellulaires, et des images fluorescentes pour surveiller l’expression des protéines fluorescentes.

Comparez les images en accéléré, en contraste de phase et fluorescentes pour suivre la division et la différenciation des cellules progénitrices en lignées neuronales.

Pour imager les cellules transduites par des rétrovirus, placez la plaque de culture tissulaire dans une chambre d’imagerie reliée à des contrôleurs de température et de dioxyde de carbone pour maintenir les cellules dans des conditions constantes de 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone.

Sélectionnez une position dans l’axe XY qui servira de point zéro et calibrez le point zéro. Sélectionnez 10 à 15 positions par puits pour obtenir une image à un grossissement de 10 fois. Réglez le logiciel pour qu’il acquière des images en contraste de phase toutes les cinq minutes et des images de fluorescence toutes les trois heures afin de réduire la phototoxicité. Vérifiez et ajustez la mise au point au cours des trois premières heures de l’expérience, car elle peut changer pendant que la température s’équilibre.