Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:59 min • June 17th, 2025
Commencez par une tranche cérébelleuse obtenue à partir du cerveau d’un raton postnatal dans une plaque multi-puits contenant du milieu.
Retirez le milieu et incubez la tranche dans une solution de colorant fluorescent cytoplasmique pour marquer les cellules granulaires (GC).
Transférez la tranche sur une membrane d’insertion transwell et retirez tout excès de colorant.
Retirez l’insert et remplissez le puits de support. Ensuite, replacez l’insert et ajoutez un support pour couvrir le tissu.
Incuber pour permettre au tissu de se fixer à la membrane de l’insert.
Transférez la plaque dans un incubateur fixé à un macroscope confocal et placez un couvercle en verre sur la plaque.
Réglez les conditions de culture, incubez davantage le tissu, puis commencez l’imagerie.
Lors de l’éclairage laser, les GC marqués deviennent fluorescents.
Capturez des images en accéléré pour visualiser la migration radiale des GC à travers la couche moléculaire du cervelet.
À l’aide d’un logiciel d’imagerie, analysez la distance migratoire des GC.
Après avoir tranché l’échantillon, utilisez une pipette à bulbe blanc tronqué pour les transférer avec un peu de HBSS dans une plaque à six puits. Chargez jusqu’à trois tra
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