JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 2:24 min • June 17th, 2025
Commencez avec une souris anesthésiée sécurisée dans un système de cage mobile.
La souris est dotée d’une lentille à indice de réfraction dégradé pré-implantée ciblant l’amygdale du cerveau, où les neurones expriment une protéine fluorescente sensible au calcium.
La surface de l’objectif est couverte pour la protection.
Laissez la souris se réveiller, puis appliquez un flux d’air pour une rotation sans friction de la cage.
Retirez le couvercle de l’objectif et placez un microscope miniaturisé au-dessus du cerveau.
Allumez la LED du microscope. Ensuite, alignez le microscope de manière à ce que l’objectif soit centré dans le champ de vision.
Capturez l’image de l’objectif et ajustez la position du microscope.
Lorsque la cage tourne, les mouvements des pattes de la souris génèrent la peur, stimulant les neurones de l’amygdale.
Cela déclenche un afflux d’ions calcium, qui se lient aux indicateurs fluorescents.
La lumière LED excite ces indicateurs liés au calcium, ce qui les rend fluorescents.
La lentille à indice de réfraction à gradient capture et transmet efficacement cette fluorescence au microscope.
Cela permet l’imagerie calcique en temps réel de l’activité neuronale de l’amygdale.
Pour évaluer la qualité de l’implantation de la lentille GRIN, placez une cage en carbone sous la souris anesthésiée sur la barre de tête d’un système de cage de maison mobile, et activez le flux d’air de sorte que la cage se déplace librement sans friction. À l’aide d’une pince de microscope et d’un manipulateur stéréotaxique, alignez verticalement un microscope miniaturisé sur le cadre, avant d’abaisser le microscope jusqu’à ce que la surface de la lentille GRIN implantée apparaisse dans le champ de vision de l’image dans le logiciel. Alignez le centre de la lentille GRIN implantée avec le centre du champ de vision et capturez l’image de la surface de la lentille GRIN implantée. Ensuite, soulevez lentement la lentille de l’objectif du microscope tout en observant l’image pour voir apparaître les cellules exprimant GCaMP.