Imagerie calcique en temps réel du cortex préfrontal médian d’une souris à l’aide d’un miniscope

Prenons l’exemple d’une souris transduite anesthésiée implantée avec une lentille à gradient ciblant le cortex préfrontal médian, où les neurones expriment des indicateurs calciques génétiquement codés.

Retirez le capuchon de l’objectif et nettoyez sa surface pour une transmission claire de la lumière.

Fixez le miniscope au support d’objectif.

Ajustez la position du miniscope pour identifier le plan focal optimal. Cet ajustement assure une visualisation claire des corps cellulaires neuronaux.

Détachez le câble et laissez la souris récupérer.

Connectez le câble au miniscope et transférez la souris dans une chambre avec une configuration d’enregistrement comportemental.

Pendant l’imagerie, le miniscope émet de la lumière pour exciter les indicateurs de calcium, qui deviennent fluorescents lors de l’afflux de calcium intracellulaire.

La lentille à gradient relaie ces signaux optiques des tissus cérébraux profonds vers le miniscope, réduisant ainsi la diffusion de la lumière et permettant de visualiser en temps réel l’activité neuronale.

Traitez l’activité transitoire calcique enregistrée avec des observations comportementales pour corréler l’activité neuronale à des comportements spécifiques.

Après avoir brièvement anesthésié la souris avec de l’isoflurane, desserrez la vis de verrouillage de la base à l’aide d’un petit tournevis avant de retirer le capuchon de protection, et nettoyez la surface de la lentille GRIN avec un coton-tige imbibé d’acétone. Connectez le miniscope au câble et démarrez le logiciel NewView pour commencer à identifier le meilleur plan focal en ajustant la position du miniscope par rapport à la base en serrant ou en desserrant légèrement à l’aide d’une pince émoussée. Une fois le meilleur plan focal déterminé, serrez la vis de verrouillage avant de débrancher le câble et de remettre la souris dans sa cage d’origine.

Activez le logiciel de la caméra comportementale pour afficher l’arène de comportement de la souris via une fonction de diffusion en direct. Ajustez manuellement la mise au point de l’appareil photo supérieur. Sélectionnez Trigger Strobe et cochez Activer/désactiver le déclencheur, puis cliquez sur le bouton Enregistrer. Ensuite, utilisez la navigation pour sélectionner l’emplacement où les enregistrements de comportement seront enregistrés. Sélectionnez le format d’image souhaité.

Rapprochez la souris de l’arène et connectez le miniscope au câble relié au système d’acquisition de données. Ensuite, placez la souris au centre de l’arène. Dans le logiciel de la caméra comportementale, cliquez sur Démarrer l’enregistrement.

Dans NewView, cochez LED1, cliquez sur Capturer, puis déclenchez les boutons pour démarrer l’enregistrement. Cela permet des enregistrements simultanés de l’imagerie calcique et du comportement de la souris. Appuyez sur Stop après 3 000 images et enregistrez les fichiers.