Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:06 min • June 17th, 2025
Commencez avec des larves de poisson-zèbre transgénique anesthésiées dans une chambre de montage contenant un tampon physiologique oxygéné sous un stéréomicroscope.
Le cervelet dans le cerveau contient des neurones de Purkinje génétiquement modifiés exprimant des protéines cytoplasmiques fluorescentes.
Retirez l’excès de milieu, puis ajoutez de l’agarose fondue pour immobiliser les larves afin une imagerie stable.
Orientez les larves, côté dorsal vers le haut, pour visualiser le cervelet.
Une fois solidifié, coupez l’excès d’agarose. À l’aide d’une aiguille de verre, excisez la peau pigmentée recouvrant le cerveau pour l’exposer.
Retournez le bloc d’agarose sur une chambre d’imagerie contenant de l’agarose fondue pour l’imagerie sous un microscope inversé.
Ajouter le tampon physiologique pour préserver la fonction neuronale.
Placez la chambre sous un microscope confocal inversé. Appliquez une lumière d’excitation pour exciter les protéines fluorescentes, ce qui permet de visualiser les neurones marqués.
Les cellules pigmentées de la peau, si elles ne sont pas éliminées, diffusent et absorbent la lumière d’excitation, réduisant ainsi l’intensité de la fluorescence.
L’ablation de la peau amél
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