Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:15 min • June 17th, 2025
Commençons par un explant rétinien de souris postnatales vivantes monté sur un filtre à membrane et placé dans une chambre d’incubation sous un microscope confocal.
La rétine est transfectée pour exprimer une protéine fluorescente dans les membranes des interneurones amacrines en étoile.
Placez un poids d’échantillon pré-humidifié sur la rétine pour la stabiliser.
Remplissez la chambre avec un tampon.
Maintenir un débit tampon et une température optimaux dans la chambre pour préserver la viabilité neuronale.
Positionnez un objectif à immersion dans l’eau dans la chambre d’imagerie.
Démarrez l’imagerie par épifluorescence.
La lumière laser, dirigée à travers l’objectif, excite la protéine fluorescente dans les cellules amacrines.
La fluorescence émise est capturée par le même objectif, ce qui permet de visualiser les cellules amacrines marquées.
Identifiez une cellule fluorescente pour l’imagerie.
Définissez les paramètres d’imagerie.
Capturez des images sur plusieurs plans Z pour obtenir une visualisation 3D de la morphologie dendritique complète.
Effectuez une imagerie en accéléré pour suivre les changements de morphologie dendritique au fil du temps.
Assemblez la chambre d’incubation d’image
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques