Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:23 min • June 17th, 2025
Prenez une co-culture de cellules gliales olfactives engainantes humaines immortalisées, ou OEG, et de neurones ganglionnaires rétiniens de rat axotomisés, ou RGN, sur une lamelle.
Les cellules OEG présentent des propriétés neurorégénératives qui facilitent la régénération axonale dans les RGN.
Les RGN sont immunomarqués de sorte que leurs somas, ou corps cellulaires, deviennent fluorescents en rouge tandis que leurs axones deviennent fluorescents en vert.
À l’aide d’un support de montage, montez la lamelle contenant les cellules.
Utilisez un microscope à épifluorescence pour capturer plusieurs images de RGN.
Ouvrez une image dans un logiciel d’imagerie.
Quantifier le pourcentage de neurones avec les axones par rapport au nombre total de RGN.
Ensuite, tracez un axone en partant du soma jusqu’à la fin et commencez le suivi axonal pour déterminer les longueurs de tous les axones.
Quantifiez l’indice de régénération axonale en divisant la somme de toutes les longueurs axonales par le nombre total de RGN.
Montez les lamelles avec un support de montage et maintenez-les à 4 degrés Celsius. Utilisez l’objectif 40 fois d’un microscope à épifluorescence pour quantifier la régénération axonale. Quantifier le pourcentage de neurones dotés d’axones par rapport à la population totale de neurones ganglionnaires rétiniens.
Utilisez le plugin NeuronJ dans ImageJ pour quantifier l’indice de régénération axonale, ou longueur axonale moyenne, qui est la somme des longueurs de tous les axones identifiés divisée par le nombre total de neurones comptés, qu’ils aient présenté un axone ou non. Après avoir ouvert l’image, cliquez sur Analyser et réglez l’échelle en fonction des paramètres du microscope, en travaillant en pixels par micromètre. Sélectionnez Ajouter des tracés pour commencer le suivi des axones, puis suivre les axones du soma à la fin. Cliquez sur Mesurer les tracés, afficher les mesures de suivi et Exécuter.