Livraison de gènes sous-piaux dans la moelle épinière de souris pour évaluer l’expression des gènes

Prenez une souris anesthésiée, rasez-lui le dos et désinfectez la peau.

Incisez la peau, détachez les muscles des vertèbres et rétractez-les à l’aide de pinces.

Percez les lames vertébrales pour créer des fissures, puis retirez les fragments d’os pour exposer la dure-mère, la membrane externe de la moelle épinière.

À l’aide d’une aiguille, créez une ouverture durale et percez la pie-mère sous-jacente pour qu’elle pénètre dans l’espace sous-pial afin d’accéder directement au tissu rachidien.

Prenez une aiguille d’administration contenant une suspension de virus adéno-associé recombinant portant un gène exprimant une protéine fluorescente et injectez la suspension.

Retirez l’aiguille, suturez les muscles et la peau et laissez la souris récupérer.

Le virus se lie aux récepteurs des neurones et des cellules gliales et est endocytosé.

Une fois à l’intérieur du noyau, le virus déclenche l’expression génique pour produire des protéines fluorescentes.

Le modèle d’administration du gène sous-pial est maintenant prêt à évaluer l’expression du gène cible dans la moelle épinière.

Commencez par anesthésier correctement l’animal pour la chirurgie. L’isoflurane est utilisé ici. Assurez-vous de l’absence