Visualisation des réseaux neuronaux et vasculaires dans un embryon de poulet

Commencez avec un œuf de poule fécondé fenêtré contenant un embryon à un stade précoce avec son tube neural excisé au niveau des somites un à sept.

Prenez un tube neural de donneur marqué à la GFP d’un embryon de poulet transgénique apparié et implantez-le dans le receveur, en veillant à ce qu’il s’oriente anatomiquement correctement.

Retirez l’excès de liquide autour du greffon pour améliorer l’adhérence entre les tissus du donneur et de l’hôte.

Scellez la fenêtre avec du ruban adhésif transparent pour éviter la déshydratation et la contamination.

Incuber l’ovule jusqu’à ce que l’embryon se développe jusqu’au stade souhaité.

Retirez le ruban adhésif.

Identifiez une veine vitelline sur le jaune qui transporte le sang vers l’embryon et retirez la membrane vitelline sus-jacente.

À l’aide d’une aiguille de verre, injectez régulièrement un colorant fluorescent lipophile dans la veine.

Visualisez l’embryon au microscope à stéréofluorescence.

Le colorant injecté se lie aux cellules endothéliales qui tapissent les vaisseaux sanguins, mettant en évidence le réseau vasculaire, tandis que le tube neural marqué à la GFP permet le suivi du réseau neuronal.

Lorsque vous êtes prêt à commencer la procédur