Imagerie des transitoires calciques rapides dans les terminaisons nerveuses de souris à l’aide de la microscopie confocale

Commencez avec une chambre expérimentale recouverte d’élastomère de silicone contenant un muscle de souris sécurisé positionné sous un microscope confocal.

Le muscle est immergé dans une solution physiologique contenant des inhibiteurs qui bloquent les contractions musculaires.

Le moignon nerveux marqué avec un colorant calcique fluorescent est positionné à l’intérieur de l’électrode d’aspiration, qui est reliée à un stimulateur électrique.

Au niveau de la jonction neuromusculaire, le nerf périphérique est relié au muscle.

Appliquez un stimulus électrique sur le nerf à l’aide de l’électrode. Cela déclenche un afflux rapide d’ions calcium qui se lient au colorant calcique intracellulaire.

Illuminez la jonction neuromusculaire pour exciter le colorant calcique, ce qui le rend fluorescent.

Ensuite, capturez des images haute résolution pour enregistrer les transitoires calciques rapides dans les terminaisons nerveuses périphériques.

Sélectionnez la région d’intérêt et mesurez l’intensité de fluorescence.

Une augmentation rapide de l’intensité de la fluorescence indique un afflux de calcium au niveau des terminaisons nerveuses périphériques, tandis qu’une diminution reflète la clairance du calc