Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:33 min • August 7th, 2025
Prendre une culture de cellules de neuroblastome dans une plaque multipuits avec un milieu.
Remplacez les milieux dans les puits par des milieux neuronaux sans glucose pour induire un stress oxydatif.
Positionnez la plaque sous la buse à jet de plasma à une distance optimale pour une exposition uniforme.
Traiter les puits sélectionnés avec une faible dose de jet de plasma à pression atmosphérique à base d’hélium (APPJ), qui génère des niveaux contrôlés d’espèces réactives d’oxygène et d’azote.
Incuber les cellules pour permettre l’activation des voies de réponse au stress et la régulation positive des enzymes antioxydantes dans les puits traités par APPJ.
Les cellules des puits non traités sous privation de glucose subissent d’autres dommages cellulaires oxydatifs.
Ajouter le réactif de test de viabilité cellulaire et incuber. Les cellules viables réduisent le réactif en un produit coloré.
Mesurez l’intensité des couleurs à l’aide d’un lecteur de microplaques.
Les puits traités par APPJ présentent une intensité de couleur accrue en raison d’une viabilité cellulaire plus élevée, tandis que les puits non traités présentent une intensité plus faible, confirmant l’effet neuroprotecteur de l’APPJ en cas de privation de glucose.
Ajustez la distance entre la buse du tube de quartz et la plate-forme où la plaque de 96 puits sera placée à trois centimètres pour vous assurer que le faisceau peut toucher la surface du milieu de culture. Avant le traitement, changer le milieu de culture dans chaque puits pour RPMI 1640 sans milieu de glucose. Maintenant, placez la plaque sous la buse de jet de plasma à pression atmosphérique. Traitez ensuite les cellules dans des puits séparés pendant 0, 1, 2, 4, 8 et 12 secondes.
Après le traitement, incubez les cellules pendant une heure dans un incubateur cellulaire à 37 degrés Celsius, après une incubation à 10 microlitres de la solution du kit de comptage cellulaire 8 dans chaque puits. Ensuite, incubez les cellules à 37 degrés Celsius pendant quatre heures. Enfin, mesurez l’absorbance à 450 nanomètres à l’aide d’un lecteur de microplaques.