Administration intranasale de siRNA dans le cerveau de la souris à l’aide d’un dispositif de positionnement

Commencez avec des souris anesthésiées placées sur un dispositif de positionnement, le dos parallèle au support dorsal de la chaise et perpendiculaire au siège.

Les souris sont positionnées dans une posture tête baissée et avancée et sécurisées à l’aide de ceintures de chaise.

À l’aide d’une micropipette chargée d’un complexe peptide-siRNA ciblant les neurones, placez une goutte près d’une narine, permettant à la souris d’inhaler la solution naturellement.

Appuyez doucement sur la tête de la souris vers le bas pendant l’inhalation pour éviter que la solution ne s’écoule dans les poumons.

Faites une brève pause, puis répétez l’administration dans l’autre narine.

Répétez la procédure pour les souris restantes.

Le complexe pénètre dans la muqueuse nasale, d’où il pénètre dans les nerfs olfactif et trijumeau et les traverse pour atteindre le cerveau.

À l’intérieur du cerveau, le complexe se lie aux récepteurs neuronaux, subit une endocytose et facilite l’administration intracellulaire de siRN.

Le siRNA fait partie du complexe RISC, qui, en se liant à l’ARNm cible, induit le silençage génique.

Pour commencer cette procédure, évaluez le niveau d’anesthésie du réflexe bipède de la souris afin de maintenir le plan chirurgical. Ensuite, placez le dispositif de positionnement à une distance et à une hauteur appropriées pour permettre un accès pratique à tous les réactifs requis.

Appliquez ensuite une pommade sur les yeux de l’animal. Attachez une souris avec des ceintures de chaise, en vous assurant que les membres antérieurs de la souris offrent un soutien naturel pendant qu’elle est dans une position détendue sans aucune gêne. Répétez les procédures pour les souris restantes. Placez délicatement chaque souris sur la chaise désignée en posant son dos parallèlement au support dorsal de la chaise et à 90 degrés par rapport au siège de la chaise.

Laissez l’animal s’allonger naturellement en position tête baissée et en avant sans pousser ni presser. Une fois que toutes les souris sont attachées, commencez immédiatement l’inoculation intranasale. Pour effectuer une administration intranasale, chargez la micropipette avec 2 microlitres de solution complexe RVG9R-siRNA. Tenez la pipette dans la main dominante et soutenez-la avec l’autre main pour éviter les mouvements incontrôlés lors de l’administration de siRNA.

Placez une gouttelette d’environ 2 microlitres très près d’une narine afin que la souris puisse l’inhaler directement. Si une petite goutte ne se forme pas facilement, remplacez l’embout de la pipette par un nouveau et répétez l’opération. Poussez doucement la tête de la souris vers le bas avec l’index pendant 5 secondes pendant qu’elle inspire et maintenez la position.

Pour éviter l’écoulement du médicament dans les poumons, il est important de pousser légèrement la tête de la souris vers le bas avec l’index pendant 5 secondes pendant que la souris inhale.

Démarrez un chronomètre pour horloger trois à quatre minutes après cela afin de chronométrer l’inoculation dans le deuxième nai de la première souris. Cet intervalle de temps est nécessaire pour que la souris termine l’inhalation de la première dose et rétablisse une respiration normale. Dans l’intervalle de trois à quatre minutes entre l’inoculation de narines alternées sur la première souris, inoculation intranasale complète d’une nare chez chacune des trois souris restantes placées sur le dispositif.

Lorsque le chronomètre sonne, inoculez la deuxième narine sur la première souris et répétez la procédure pour les autres souris comme ci-dessus. Répétez la procédure jusqu’à ce que les 20 à 30 microlitres soient délivrés pour les quatre souris. Il faudra environ 30 à 45 minutes pour terminer toute la procédure d’inoculation. Remettez les animaux dans leurs cages désignées. Ne laissez pas les souris sans surveillance jusqu’à ce qu’elles aient repris une conscience suffisante pour maintenir la décubitus sternal.