Imagerie in vivo des réponses des neurones ganglionnaires géniculés à l’aide de la microscopie épifluorescente

Commençons par une souris anesthésiée avec un ganglion géniculé exposé chirurgicalement, un groupe de neurones périphériques de traitement du goût.

Ces neurones expriment GCaMP, un indicateur de calcium qui devient fluorescent lors de la liaison du calcium.

Retirez tout liquide recouvrant le ganglion pour une visualisation claire.

Placez la souris sur un tampon absorbant sous un microscope et localisez le ganglion géniculé à l’aide de repères anatomiques.

À l’aide d’un filtre approprié sur l’endoscope d’épifluorescence, détectez la fluorescence verte des neurones exprimant GCaMP.

Ensuite, insérez une aiguille de distribution reliée au tube d’administration du tastant dans la bouche de la souris et délivrez le tastant.

Le savourateur stimule les cellules réceptrices du goût, libérant de l’ATP, qui se lie aux récepteurs des neurones ganglionnaires, déclenchant un afflux de calcium.

Ces ions calcium se lient aux GCaMPs, induisant l’émission de fluorescence.

Alignez la caméra sur le champ de vision du microscope et synchronisez l’enregistrement vidéo avec la diffusion de savoureux pour capturer l’activité neuronale en temps réel grâce aux changements de fluorescence.

Pour faire fonctionner le panneau de dégustation, utilisez l’aspiration pour retirer le liquide du geniculate et placez la souris sur un tampon absorbant sous un microscope à dissection. Utilisez le trou laissé dans la bulle, le trou dans l’os temporal et le septième nerf pour localiser le ganglion géniculé. Et utilisez le filtre FITC/GFP sur l’endoscope d’épifluorescence pour vérifier la présence de neurones ganglionnaires géniculés exprimant GCaMP. Placez fermement l’aiguille de distribution d’une ligne de dégustation dans la bouche de l’animal. Synchronisez le début de l’enregistrement vidéo avec le début de la présentation savoureuse, en regardant le flux en direct pour les réponses.