Isolement et purification de glycoprotéines d’oligodendrocytes de myéline recombinante

MOGtag est une glycoprotéine oligodendrocytaire de myéline recombinante fusionnée avec des marqueurs de solubilisation et de purification pour les études expérimentales sur l’encéphalomyélite auto-immune.

Pour isoler MOGtag, suspendez les cellules bactériennes exprimant MOGtag dans un tampon de lyse et incubez.

Les enzymes et les détergents contenus dans le tampon perturbent les lipides membranaires et dégradent la paroi cellulaire.

Sonicate pour lyser davantage les cellules, libérant des corps d’inclusion insolubles contenant MOGtag.

Centrifugeuse pour granuler les corps d’inclusion. Jetez le surnageant, remettez la pastille en suspension dans le tampon et incuberez.

Ajouter le chlorhydrate de guanidine, puis incuber pour solubiliser le MOGtag.

Transférez les protéines solubles sur une résine de nickel chargée, mélangez et incubez en secouant pour permettre au MOGtag de se lier aux ions nickel.

Centrifugeuse pour granuler le MOGtag lié. Retirez le surnageant, remettez la pastille en suspension dans un tampon d’élution et incubez en secouant.

L’imidazole dans le tampon d’élution libère le MOGtag de la résine.

Centrifugez à nouveau, récupérez le surnageant purifié contenant du MOGtag et stoc