JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 2:15 min • June 17th, 2025
Commençons par les cellules de Schwann ou SC, cellules gliales myélinisantes du système nerveux périphérique, cultivées dans des milieux.
Transférez les cellules dans une parabole colorimétrique équipée d’électrodes des deux côtés.
Placez l’antenne sur un dispositif à champ électrique pulsé nanoseconde ou nsPEF et réglez l’intensité du champ électrique souhaitée.
Appliquez des impulsions nsPEF en tournant soigneusement les électrodes jusqu’à ce que des étincelles apparaissent.
Immédiatement après la stimulation, séparez les électrodes et poursuivez la culture des cellules.
nsPEF perturbe les membranes SC, créant des nanopores transitoires qui permettent l’afflux de calcium. Les membranes finissent par se refermer.
Le calcium intracellulaire active les protéines de liaison au calcium, déclenchant des voies de signalisation qui régulent à la hausse les gènes impliqués dans la progression du cycle cellulaire.
La signalisation calcique soutenue active également les facteurs de transcription qui entraînent la dédifférenciation des SC en un phénotype de réparation, suivie d’une prolifération.
De plus, la sécrétion de facteurs neurotrophiques qui favorisent la survie et la croissance neuronales augmente.
Le modèle est maintenant prêt à étudier le rôle des SC stimulés par nsPEF dans la régénération des nerfs périphériques après une blessure.
Pour commencer, mettez en suspension les cellules RSC96 cultivées dans 1 millilitre de milieu de culture DMEM et transférez-les dans des boîtes colorimétriques avec des électrodes des deux côtés. Allumez l’interrupteur d’alimentation de l’instrument et tournez le bouton pour régler les intensités du champ électrique. Avec précaution, faites pivoter les électrodes jusqu’à ce que des étincelles apparaissent, permettant aux cellules de recevoir 5 impulsions de champs électriques pulsés nanosecondes selon les intensités de champ prédéfinies. Séparez immédiatement les deux électrodes après le traitement.