JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 2:25 min • August 7th, 2025
Prenez un micro-injecteur avec une micro-aiguille contenant un vecteur viral de transport rétrograde ou HiRet très efficace.
Les glycoprotéines de l’enveloppe du virus HiRet facilitent son entrée dans les neurones via les synapses. Le virus est également porteur d’un gène codant pour une protéine fluorescente.
Prenez un rat anesthésié avec une moelle épinière lombaire exposée 1 à 4.
En utilisant la ligne médiane de la moelle épinière comme référence, positionnez l’aiguille au-dessus du site d’injection.
Abaissez l’aiguille dans la moelle épinière.
Commencez à administrer le virus à un rythme contrôlé.
Prévoyez suffisamment de temps pour la diffusion virale avant de retirer l’aiguille.
Les récepteurs neuronaux se lient aux glycoprotéines virales, facilitant l’entrée du virus par la synapse et le transport à travers l’axone jusqu’au soma, un processus appelé transport rétrograde.
Le gène viral est intégré au génome de l’hôte, ce qui permet l’expression de protéines fluorescentes.
Ces virus voyagent également à travers des neurones connectés, permettant le suivi des voies neuronales.
Placez l’aiguille sur la ligne médiane de la moelle épinière et utilisez l’échelle de Vernier sur le micromanipulateur pour diriger l’aiguille latéralement sur 0,8 millimètre. Abaissez ensuite l’aiguille jusqu’à la moelle épinière jusqu’à ce qu’elle soit en retrait, mais sans perforer la dure-mère. Et utilisez un mouvement de torsion rapide pour percer la dure-mère avec l’aiguille jusqu’à ce que la pointe de l’aiguille s’enfonce à une profondeur de 1,5 millimètre.
Une fois l’aiguille en place, programmez l’injecteur pour qu’il délivre le virus à une vitesse de 400 nanolitres par minute et confirmez que le virus pénètre dans la moelle épinière en observant la progression du front du colorant. Une fois l’injection terminée, laissez l’aiguille reposer dans la moelle épinière pendant deux à cinq minutes pour faciliter la propagation du virus, avant de retirer lentement l’aiguille pour la positionner au prochain site d’injection.