Transfection médiée par électroporation des ganglions de la racine dorsale de souris pour favoriser la régénération sensorielle des axones

Prenons l’exemple d’une souris anesthésiée dont les ganglions de la racine dorsale L4 et L5 sont exposés et contiennent des corps cellulaires neuronaux sensoriels.

Chargez une pipette de micro-injection avec des constructions d’ARN marquées au fluorophore qui régulent la régénération axonale et un colorant traceur.

Injectez le mélange dans les DRG.

À l’aide d’électrodes d’électroporation, appliquez des impulsions électriques aux DRG.

Cela perturbe les membranes des corps cellulaires sensoriels des neurones, créant des pores qui permettent aux constructions de pénétrer dans le cytoplasme, facilitant ainsi la transfection.

Suturez l’incision et laissez la souris récupérer.

Après quelques jours, anesthésie à nouveau et sécurise la souris.

Faites une incision latérale à la ligne médiane sur la gauche. Disséquez les muscles pour exposer le nerf sciatique.

Écrasez le nerf pour endommager les axones des neurones sensoriels. Marquez l’emplacement avec un nœud de suture.

Suturez l’incision et laissez la souris récupérer.

Les constructions transfectées ciblent les ARNm dans les corps cellulaires des neurones sensoriels DRG, modulant transitoirement la production de protéines pour améliorer la régénération des axones sensoriels après une lésion.

Pour l’injection de DRG, chargez les plasmides d’ADN ou les oligonucléotides d’ARN dans la pipette capillaire en verre. Insérez ensuite soigneusement l’extrémité de la pipette en verre capillaire dans le DRG. Et injectez progressivement 1 solution d’un microlitre de plasmides d’ADN ou d’oligos d’ARN à l’aide du système de distribution de micro-injection intracellulaire.

Pour l’électroporation, pincez doucement le DRG cible avec les électrodes et appliquez des impulsions électriques de 5 carrés avec le système d’électroporation. Par la suite, fermez le muscle, puis les couches de peau avec des sutures en nylon. Deux ou trois jours après l’électroporation DRG, anesthésie la souris par voie intrapéritonéale, colle ses membres sur le tableau de liège et fais une incision de 1 centimètre à 0,5 centimètre sur le côté gauche le long de la ligne médiane.

Ensuite, coupez les muscles, tels que le muscle fessier et le muscle piriforme, longitudinalement. Exposez ensuite le segment du nerf sciatique entre le grand foramen sciatique et l’encoche sciatique. Écrasez le nerf avec une pince de microchirurgie pendant 12 secondes et marquez le site d’écrasement avec une suture épineurale en nylon. Ensuite, fermez les couches musculaires et cutanées avec une suture en nylon.