Administration intrathécale de virus dans un modèle murin pour le traitement de maladies du système nerveux central

Remplissez une seringue avec une solution contenant des virus adéno-associés, ou AAV, et de la lidocaïne, un anesthésique local.

Placez une souris éveillée en position couchée et couvrez le haut de son corps.

Tenez la ceinture pelvienne de la souris et rasez le bas de son dos pour exposer la peau. Stérilisez-le avec de l’iode et de l’éthanol.

Localisez l’espace dans la partie inférieure de la colonne vertébrale et appuyez doucement pour le marquer.

Tournez la queue pour aligner la colonne vertébrale et insérez la seringue verticalement.

Ajustez l’angle jusqu’à ce qu’un mouvement de la queue se produise, confirmant l’entrée de l’aiguille dans l’espace intrathécal où le liquide céphalo-rachidien ou le LCR s’écoule.

Injectez lentement la solution pour une distribution uniforme.

Les particules virales se lient aux neurones, pénètrent à l’intérieur et libèrent leur matériel génétique dans le noyau, permettant ainsi une expression génique ciblée.

La lidocaïne bloque temporairement les signaux nerveux, provoquant une paralysie à court terme des jambes, confirmant ainsi un accouchement réussi dans le LCR.

Ce protocole établit l’administration intrathécale comme une méthode efficace pour traiter les maladies du SNC.

Avant de commencer la procédure, fixez une aiguille de calibre 27 à une seringue Hamilton de 25 microlitres et alignez la pointe biseautée de l’aiguille avec l’échelle volumétrique de la seringue, puis chargez soigneusement 8 microlitres de 4 fois 10 à la 10e copie du génome de la solution virale dans la seringue, en prenant soin d’éviter les bulles.

Ensuite, placez une souris éveillée de 30 à 70 jours, de 12 à 30 grammes, sur un lit en position couchée dans une cagoule de biosécurité et couvrez le haut du corps avec de la gaze stérile pour calmer la souris et éviter d’être mordue. Saisissez fermement la souris sur sa ceinture pelvienne, avec un pouce d’un côté et l’index et le majeur de l’autre, en gardant la peau entre les ceintures pelviennes bilatérales tendues avec le pouce et l’index, puis rasez la fourrure entre les ceintures pelviennes bilatérales et stérilisez la peau exposée avec un gommage à base d’iodure et d’éthanol à 70 %.

Pour une administration intrathécale directe de la solution virale adéno-associée, palpez l’espace intervertébral le long de la ligne médiane entre les ceintures pelviennes bilatérales et utilisez un ongle pour enfoncer une indentation dans la peau afin d’indiquer l’espace intervertébral L5 à L6. Tournez légèrement et doucement la base de la queue pour révéler la ligne médiane de la colonne vertébrale et ajustez le biseau de l’aiguille vers la tête de l’animal. Avec la souris fermement fixée en position, alignez l’aiguille le long de la ligne médiane de la colonne vertébrale et insérez l’aiguille doucement et verticalement au centre de l’indentation, en maintenant la seringue dans un plan sagittal central.

Lorsque l’aiguille entre en contact avec l’os, diminuez lentement l’angle à environ 30 degrés et glissez l’aiguille dans l’espace intervertébral. Un coup de queue soudain est le signe d’une entrée réussie dans l’espace intradural. Lorsque l’aiguille pénètre dans l’espace intervertébral, la pointe sera fermement serrée. Injectez la solution vectorielle et maintenez l’aiguille dans l’espace intradural pendant une minute, puis retirez lentement l’aiguille en la tournant pour minimiser les fuites.