Name: Photolyse des composés en cage dans les cils olfactifs des neurones sensoriels (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 35 s
Description: Découvrez la photolyse de composés en cage pour étudier la transduction olfactive chez les neurones sensoriels de souris. Cette méthode par patch-clamp permet d'activer et de mesurer précisément les canaux ioniques impliqués dans le signal olfactif.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Ellis-Davies, G. C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caged+compounds%3A+photorelease+technology+for+control+of+cellular+chemistry+and+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Caged compounds: photorelease technology for control of cellular chemistry and physiology.</a> Nat. Methods. 4, 619-628 (2007).</li>
<li>Pifferi, S., Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+nucleotide-gated+ion+channels+in+sensory+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Cyclic nucleotide-gated ion channels in sensory transduction.</a> FEBS Lett. 580, 2853-2859 (2006).</li>
<li>Bozza, T. C., Kauer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+response+properties+of+convergent+olfactory+receptor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Odorant response properties of convergent olfactory receptor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 4560-4569 (1998).</li>
<li>Hagen, V., Bendig, J., Frings, S., Eckardt, T., Helm, S., Reuter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Efficient+and+Ultrafast+Phototriggers+for+cAMP+and+cGMP+by+Using+Long-Wavelength+UV%2FVis-Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Highly Efficient and Ultrafast Phototriggers for cAMP and cGMP by Using Long-Wavelength UV/Vis-Activation.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 40, 1045-1048 (2001).</li>
<li>Kaplan, J. H., Ellis-Davies, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photolabile+chelators+for+the+rapid+photorelease+of+divalent+cations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Photolabile chelators for the rapid photorelease of divalent cations.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 6571-6575 (1988).</li>
<li>Rapp, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+lamp-based+irradiation+of+caged+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Flash lamp-based irradiation of caged compounds.</a> Methods. Enzymol. 291, 202-222 (1998).</li>
<li>Gurney, A. M. Flash photolysis of caged compounds. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGurney%2C+AM+%22Microelectrodes%3A+Theory+and+Applications%22">Microelectrodes: Theory and Applications</a>. Montenegro, I., Queiros, M. A., Daschbach, J. L. , Proc. NATO Adv. Study Inst. Portugal. (1991).</li>
<li>Lagostena, L., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-cell+recordings+and+photolysis+of+caged+compounds+in+olfactory+sensory+neurons+isolated+from+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">Whole-cell recordings and photolysis of caged compounds in olfactory sensory neurons isolated from the mouse.</a> Chem. Senses. 28, 705-716 (2003).</li>
<li>Boccaccio, A., Lagostena, L., Hagen, V., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+adaptation+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+does+not+require+the+activity+of+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Fast adaptation in mouse olfactory sensory neurons does not require the activity of phosphodiesterase.</a> J. Gen. Physiol. 128, 171-184 (2006).</li>
<li>Boccaccio, A., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+development+of+cyclic+nucleotide-gated+and+Ca2%2B+-activated+Cl-+currents+in+isolated+mouse+olfactory+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Temporal development of cyclic nucleotide-gated and Ca2+ -activated Cl- currents in isolated mouse olfactory sensory neurons.</a> J. Neurophysiol. 98, 153-160 (2007).</li>
<li>Sagheddu, C., Boccaccio, A., Dibattista, M., Montani, G., Tirindelli, R., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+concentration+jumps+reveal+dynamic+ion+selectivity+of+calcium-activated+chloride+currents+in+mouse+olfactory+sensory+neurons+and+TMEM16B-transfected+HEK+293T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium concentration jumps reveal dynamic ion selectivity of calcium-activated chloride currents in mouse olfactory sensory neurons and TMEM16B-transfected HEK 293T cells.</a> J. Physiol. 588, 4189-4204 (2010).</li>
<li>Balana, B., Taylor, N., Slesinger, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutagenesis+and+Functional+Analysis+of+Ion+Channels+Heterologously+Expressed+in+Mammalian+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells.</a> J. Vis. Exp. (44), e2189-e2189 (2010).</li>
<li>Cygnar, K. D., Stephan, A. B., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+Responses+of+Mouse+Olfactory+Sensory+Neurons+Using+the+Air-phase+Electroolfactogram+Recording%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording.</a> J. Vis. Exp. (37), e1850-e1850 (2010).</li>
<li>Bernardinelli, Y., Haeberli, C., Chatton, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+photolysis+using+a+light+emitting+diode%3A+an+efficient%2C+compact%2C+and+affordable+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Calcium%22%5BJournal%5D)">Flash photolysis using a light emitting diode: an efficient, compact, and affordable solution.</a> Cell. Calcium. 37, 565-572 (2005).</li>
</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Photolyse de composés en cage combiné avec des enregistrements de patch-clamp est une technique utile pour obtenir des sauts rapides et locales de la concentration de molécules actives physiologiquement à l&#39;intérieur et l&#39;extérieur des cellules. Plusieurs types de composés1 cage ont été synthétisés, et cette technique peut être appliquée à divers types de cellules, y compris les cellules en culture exprimant les canaux ioniques qui peuvent être activées ou modulée par photolyse de certains des composés disponibl...

<table border="1"><tbody><tr><th> Équipement </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires </th></tr><tr><td> Adapter Module lampe flash au microscope </td><td> Rapp optoélectroniques </td><td> FlashCube 70 </td><td></td></tr><tr><td> Air de table </td><td> TMC </td><td> Micro-g 63-534 </td><td></td></tr><tr><td> Digitizer </td><td> Axon Instruments </td><td> Digidata 1322A </td><td></td></tr><tr><td> Logiciel d&#39;acquisition de données </td><td> Axon Instruments </td><td> pClamp 8 </td><td></td></tr><tr><td> Logiciel d&#39;analyse de données </td><td> WaveMetrics </td><td> Igor </td><td></td></tr><tr><td> Miroir pour module adaptateur </td><td> Rapp optoélectroniques </td><td> M70/100 </td><td></td></tr><tr><td> Porte-électrode </td><td> Axon Instruments </td><td> 1-HL-U </td><td></td></tr><tr><td> Faraday cage </td><td> Custom made </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cube de filtre </td><td> Olympus </td><td> U-UTH </td><td> Filtre d&#39;excitation enlevés </td></tr><tr><td> Lampe flash </td><td> Rapp optoélectroniques </td><td> JML-C2 </td><td></td></tr><tr><td> Pince Dumont # 55 </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> 14099 </td><td></td></tr><tr><td> Capillaires en verre </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> PG10165-4 </td><td></td></tr><tr><td> Plat à fond de verre </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> FD35-100 </td><td></td></tr><tr><td> Illuminateur </td><td> Olympus </td><td> Highlight 3100 </td><td></td></tr><tr><td> Microscope inversé </td><td> Olympus </td><td> IX70 </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulateurs </td><td> Luigs &amp; Neumann </td><td> SM I </td><td></td></tr><tr><td> Micropipette Puller </td><td> Narishige </td><td> PP-830 </td><td></td></tr><tr><td> Moniteur </td><td> HesaVision </td><td> MTB-01 </td><td></td></tr><tr><td> Les filtres neutres </td><td> Omega Optical </td><td> varie </td><td></td></tr><tr><td> Objectif 100X </td><td> Zeiss </td><td> Fluar 440285 </td><td> Soit Zeiss ou Olympus </td></tr><tr><td> Objectif 100X </td><td> Olympus </td><td> UPLFLN 100XOI2 </td><td> Soit Zeiss ou Olympus </td></tr><tr><td> Optique UV shortpass filtre </td><td> Rapp optoélectroniques </td><td> SP400 </td><td></td></tr><tr><td> Amplificateur de patch-clamp </td><td> Axon Instruments </td><td> Axopatch 200B </td><td></td></tr><tr><td> Assemblée diode photo </td><td> Rapp optoélectroniques </td><td> PDA </td><td></td></tr><tr><td> Quartz guide de lumière </td><td> Rapp optoélectroniques </td><td> varie </td><td> Nous utilisons 600 um de diamètre </td></tr><tr><td> Fil d&#39;Argent </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> AGT1025 </td><td></td></tr><tr><td> Argent-chaussée granulés </td><td> Warner instruments </td><td> 64-1309 </td><td></td></tr><tr><td> Xénon lampe à arc </td><td> Rapp optoélectroniques </td><td> XBL JML </td><td></td></tr></tbody></table> <table border="1"><tbody><tr><th> Réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th></tr><tr><td> BCMCM-cage AMPc </td><td> BioLog </td><td> B016 </td></tr><tr><td> Albumine sérique bovine (BSA) </td><td> Sigma </td><td> A8806 </td></tr><tr><td> CaCl2 0,1 M solution standard </td><td> Fluka </td><td> 21059 </td></tr><tr><td> Caged Ca: DMNP-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> D6814 </td></tr><tr><td> Cystéine </td><td> Sigma </td><td> C9768 </td></tr><tr><td> Concanavaline A de type V (ConA) </td><td> Sigma </td><td> C7275 </td></tr><tr><td> CsCl </td><td> Sigma </td><td> C4036 </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Sigma </td><td> D8418 </td></tr><tr><td> DNAse I </td><td> Sigma </td><td> D4527 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> E9884 </td></tr><tr><td> EGTA </td><td> Sigma </td><td> E4378 </td></tr><tr><td> Le glucose </td><td> Sigma </td><td> G5767 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Sigma </td><td> P3911 </td></tr><tr><td> KOH </td><td> Sigma </td><td> P1767 </td></tr><tr><td> Leupeptine </td><td> Sigma </td><td> L0649 </td></tr><tr><td> MgCl2 </td><td> Fluka </td><td> 63020 </td></tr><tr><td> La papaïne </td><td> Sigma </td><td> P3125 </td></tr><tr><td> Poly-L-lysine </td><td> Sigma </td><td> P1274 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Sigma </td><td> S9888 </td></tr><tr><td> NaOH </td><td> Sigma </td><td> S5881 </td></tr><tr><td> NaPyruvate </td><td> Sigma </td><td> P2256 </td></tr></tbody></table>

photolyse des composés en cage dans les cils olfactifs des neurones sensoriels

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

La photolyse de composés en cage permet la production d&#39;une augmentation rapide et localisé dans la concentration de divers composés physiologiquement actifs 1. Caged composés sont des molécules composées physiologiquement inactive par une cage chimique qui peut être rompu par un éclair de lumière ultraviolette. Ici, nous montrons comment obtenir des enregistrements de patch-clamp combinée avec la photolyse de composés en cage pour l&#39;étude de la transduction olfactive chez la souris dissocié neurones sensoriels olfactifs. Le processus de transduction olfactive (Figure 1) se déroule dans les cils olfactifs des neurones sensoriels, où se liant aux récepteurs odorants conduit à l&#39;augmentation de l&#39;AMPc qui ouvre des nucléotides cycliques-dépendants (CNG) des canaux 2. D&#39;entrée de Ca par les canaux CNG active les canaux Cl Ca-activé. Nous montrons comment dissocier les neurones de l&#39;épithélium olfactif de souris 3 et comment activer les canaux CNG ou Ca-Cl activé les canaux par photolyse de l&#39;AMPc en cage en cage 4 ou 5 Ca &lt;/ Sup&gt;. Nous utilisons une lampe flash 6,7 à appliquer clignote ultraviolets pour la région ciliaire à uncage AMPc ou Ca alors de patch-clamp enregistrements sont prises pour mesurer le courant dans la cellule entière voltage-clamp de configuration 8-11.

La photolyse de composés en cage permet la production d&#39;une augmentation rapide et localisé dans la concentration de divers composés physiologiquement actifs. Ici, nous montrons comment obtenir des enregistrements de patch-clamp combinée avec la photolyse de l&#39;AMPc en cage ou en cage Ca pour l&#39;étude de la transduction olfactive chez la souris dissocié neurones sensoriels olfactifs.

Photolyse des composés en cage dans les cils olfactifs des neurones sensoriels

La photolyse de composés cagés permet de produire des augmentations rapides et localisées de la concentration de divers composés physiologiquement actifs1. ...

Notre sens de l'odorat nous permet de détecter et de reconnaître des produits chimiques volatils présents dans l'environnement extérieur. Les odeurs se lient à des récepteurs situés dans la muqueuse des neurones sensoriels olfactifs et activent une cascade de transduction qui conduit à l'ouverture de canaux activés par les nucléotides cycliques, suivie par des canaux chlorure activés par le calcium. L'objectif général de cette procédure est de montrer comment activer directement ces canaux à l'aide d'une impulsion lumineuse sur des composés piégés, lesquels sont des molécules rendues physiologiquement inactives par un groupement chimique protecteur.Un flash de lumière ultraviolette brise une cage et libère le composé physiologiquement actif piégé. Des cyclones, mp ou du calcium piégé sont inclus dans la solution intracellulaire, remplissant une micropipette en configuration de patch, puis diffusent vers le compartiment des neurones sensoriels olfactifs. Un flash ultraviolet est appliqué à la région caryoplasmeuse afin d'activer un cyclone, un mp ou le calcium, pendant que des enregistrements en patch-clamp sont effectués pour mesurer le courant dans une configuration de clampage de

flash-photolysis-caged-compounds-cilia-olfactory-sensory

Research

Recherche

JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Microscopie multiphotonique permet de contrôler les photons de basse énergie avec une pénétration profonde et optiques phototoxicité réduite. Nous décrivons l'utilisation de cette technologie pour l'étiquetage de cellules vivantes dans des embryons de poissons zèbres. Ce protocole peut être facilement adapté à la photo-induction de diverses molécules lumière réactive.

Deux-Photon-Based photoactivation dans Live embryons de poissons zèbres

Une méthode est décrite pour la préparation des cellules photoréceptrices de vie simple de différentes espèces de vertébrés pour l'imagerie de fluorescence. La méthode peut être utilisée pour l'image de la fluorescence des fluorophores endogènes, tels que le NADH ou la vitamine A, ou celle de manière exogène ajouté des colorants fluorescents sensibles à...

Préparation de vie isolées cellules photoréceptrices vertébrés pour l&#39;imagerie de fluorescence

Nous décrivons une technique mis en place pour mesurer et analyser les odeurs évoquées réponses calciques dans le lobe antennaire de la...

Imagerie de calcium des odeurs évoquées réponses dans le Drosophila Lobe antennaire

Cet article présente les protocoles d'intrinsèques des signaux optiques et d'imagerie d'autofluorescence flavoprotéines signaux de cartographier les odeurs évoquées activités à la surface du bulbe olfactif chez la souris.

Activités d&#39;imagerie Odeur évoqués dans le bulbe olfactif de la souris en utilisant la réflectance optique et Signaux Autofluorescence

Adulte-né neurones exprimant CHR2 peuvent être manipulés dans des préparations tranche électrophysiologiques afin d'examiner leur contribution à la fonction de olfactive circuits neuronaux.

L&#39;utilisation abordable tableaux LED pour photo-stimulation des neurones

Cette vidéo présente une méthode d’imagerie calcique in vivo utilisant des capteurs de calcium localisés synaptiquement chez les mouches. Il décrit les étapes de préparation des mouches pour la microscopie, la réalisation d’un conditionnement olfactif et la visualisation de l’afflux de calcium induit par les odeurs.

in vivo Imagerie calcique à l’aide de capteurs calciques localisés synaptiquement chez Drosophila melanogaster

Avec son petit corps, transparent et documenté neuroanatomie et une foule de techniques génétiques qui se prêtent et...

En imagerie calcique in vivo des neurones en C. elegans

Nous décrivons la combinaison de l'effet des UV focal photo-activation de composés neuro-actif avec la cellule entière de patch-clamp et de l'imagerie multi-photons de transitoires de sodium intracellulaire dans les dendrites et les épines de neurones de l'hippocampe dans les tranches de tissu aiguë du cerveau de la souris.

Multi-photon intracellulaire Imaging sodium Combiné avec uncaging focale médiation-UV de glutamate dans CA1 pyramidale neurones

Nous avons développé une nouvelle technique en microscopie électronique, « flash et gel » qui permet la visualisation de la dynamique de la membrane avec ms résolution temporelle. Cette technique combine la stimulation optogenetic des neurones avec le gel à haute pression. Ici, nous démontrons les procédures et décrire les protocoles en détail.

Flash et Gel: Une nouvelle technique pour capturer la membrane dynamique avec la microscopie électronique

Les vésicules synaptiques (SV) le vélo est le mécanisme central de la communication intercellulaire au niveau des synapses neuronales. Libération et l’absorption de teinture de FM sont les principaux moyens de dosage quantitatif SV endo - et l’exocytose. Nous comparons ici, toutes les méthodes de stimulation pour conduire FM1-43 cyclisme synaptique jonction neuromusculaire (NMJ) modèle drosophile .

FM colorant cyclisme au niveau de la Synapse : en comparant la dépolarisation élevés de Potassium, électrique et Stimulation de la Channelrhodopsin

Ici nous présentons un protocole avec lequel le calcium pré- et/ou postsynaptic peut être visualisé dans le contexte de l'apprentissage et de la mémoire de Drosophila. L'imagerie in vivo de calcium utilisant des capteurs de calcium synaptically localisés est combinée avec un paradigme olfactif classique de telle sorte que la plasticité synaptique sous-jacente à ce type d'apprentissage associatif peut être déterminée.

In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster In Vivo

Découvrez la photolyse de composés en cage pour étudier la transduction olfactive chez les neurones sensoriels de souris. Cette méthode par patch-clamp permet d'activer et de mesurer précisément les canaux ioniques impliqués dans le signal olfactif.

Photolyse des composés en cage dans les cils olfactifs des neurones sensoriels

Explorer plus de vidéos