Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:35 min • June 17th, 2025
Commencez par une culture adhérente d’astrocytes primaires de souris sur une lamelle à l’intérieur d’une boîte de culture.
Incuber à l’aide d’une sonde acidotrope fluorescente qui traverse les membranes cellulaires intactes pour pénétrer dans les astrocytes.
La sonde s’accumule sélectivement à l’intérieur des vésicules endolysosomiques acides et marque par fluorescence les vésicules pour surveiller leur transport.
Lavez pour enlever l’excès de sonde et ajoutez du milieu frais.
Placez la culture sous un microscope confocal et concentrez-vous sur une seule cellule pour effectuer une imagerie en accéléré.
Visualisez la cargaison étiquetée sous forme de points fluorescents distribués dans la région périnucléaire, le
cytosol et les processus astrocytaires.
Capturez plusieurs plans focaux le long de l’axe Z pour visualiser la cargaison dans tout le volume de la cellule tridimensionnelle.
Effectuez l’imagerie à des intervalles définis pour suivre le transport de fret intracellulaire à différentes profondeurs dans les astrocytes.
Analysez le mouvement de la cargaison pour faire la distinction entre la cargaison stationnaire, la cargaison se déplaçant vers la périphérie de la cellule et la cargaiso
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