Imagerie de l’état redox mitochondrial dans les neurones primaires à l’aide d’un indicateur ratiométrique

Prenez une lamelle avec des neurones primaires génétiquement modifiés dans une chambre d’imagerie remplie d’un tampon d’imagerie.

Ces cellules expriment un indicateur redox basé sur des protéines fluorescentes dans la matrice mitochondriale.

Placez la chambre sous un microscope à fluorescence, identifiez les cellules sous la lumière visible, puis passez à l’imagerie par fluorescence.

Appliquez deux longueurs d’onde d’excitation pour stimuler l’indicateur et mesurer l’émission de fluorescence.

Le rapport d’intensité de fluorescence à ces longueurs d’onde reflète l’état d’oxydation mitochondriale.

Introduire le NMDA pour activer les récepteurs NMDA cellulaires, provoquant un afflux de calcium intracellulaire.

L’augmentation déclenche l’absorption de calcium mitochondrial, induisant la production de ROS et

l’oxydation mitochondriale.

Le ROS oxyde l’indicateur, modifie sa fluorescence et augmente le rapport du signal.

Introduisez des agents oxydants pour oxyder complètement l’indicateur, maximisant ainsi le rapport de signal.

Retirez le tampon, puis introduisez des agents réducteurs pour réduire complètement le colorant, minimisant ainsi le rapport de signal.

Utilisez les rapports de signal maxim