Injections intramusculaires le long des plaques d’extrémité motrices pour faire circuler les traceurs directement dans les motoneurones du rat

Prenez un rat anesthésié et appliquez un lubrifiant pour les yeux.

Rasez le membre ciblé, stérilisez la peau et positionnez le rat pour assurer un accès optimal au muscle ciblé.

Liftez et incisez la peau pour exposer le muscle.

Reportez-vous à des photographies de plaques d’extrémité motrices ou MEP, les régions où les terminaisons axonales des motoneurones font synapse avec les fibres musculaires pour former des jonctions neuromusculaires.

Cartographiez mentalement la région MEP sur le muscle exposé.

Prenez une micropipette en verre contenant un traceur fluorescent.

Injectez le traceur par voie intramusculaire en plusieurs points le long de la région MEP.

Retirez tout traceur en excès, fermez l’incision et administrez un analgésique.

L’injection améliore la disponibilité du traceur au niveau des jonctions neuromusculaires, facilitant son endocytose au niveau des terminaisons axonales.

Les traceurs enfermés dans les vésicules sont ensuite transportés rétrogradement vers les corps cellulaires des motoneurones de la moelle épinière.

La présence de motoneurones marqués par des traceurs dans la moelle épinière suggère le potentiel neurothérapeutique de l’administration ciblée par MEP.

Pour injecter le muscle vivant au niveau des plaques d’extrémité du moteur, utilisez d’abord un extracteur de micropipette pour tirer des micropipettes en verre gradué équipées de pistons. Ensuite, à l’aide d’un microscope à dissection, cassez les pointes des micropipettes avec une paire de pinces de sorte que le diamètre interne de chaque lumière soit d’environ 0,5 millimètre. Ensuite, remplissez les pipettes tirées d’or fluoré.

Maintenant, appliquez un lubrifiant pour les yeux sur un animal anesthésié et rasez le membre à injecter. Utilisez de la gaze pour essuyer la zone rasée avec trois gommages alternés de chlorhexidine et d’alcool à 70 %. Ensuite, placez l’animal sur un sous-coussin propre pour permettre l’accès au muscle ciblé. Lorsque l’animal est en position, utilisez une paire de pinces avec des mâchoires pour soulever la peau sur le muscle ciblé loin de la musculature sous-jacente, et utilisez des ciseaux chirurgicaux pour faire une incision dans la peau.

Veillez à ce que l’incision soit suffisamment grande pour exposer complètement le muscle d’intérêt, avec une perturbation minimale du fascia. Ensuite, à l’aide des photographies de la plaque d’extrémité du moteur, transposer mentalement l’emplacement et la forme de la région d’intérêt de la plaque d’extrémité du moteur sur le muscle, et administrer 3 à 4 injections de 1 à 2 microlitres d’or fluoré sur toute la longueur de la région de la plaque d’extrémité du moteur.

Après la dernière injection, essuyez doucement le muscle pour éliminer toute suintement. Ensuite, à l’aide d’une pince émoussée, rapprochez les deux extrémités de la peau incisée. Fermez la plaie à l’aide de pinces chirurgicales et infiltrez toute la portée de la plaie avec l’anesthésique local approprié.