Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:57 min • June 18th, 2025
Commencez avec un petit ARN interférent qui supprime l’expression de la protéine prion, une protéine liée aux maladies neurodégénératives à prions.
Ajouter une suspension de liposomes cationiques.
Le siRNA chargé négativement se lie à la surface des liposomes chargés positivement.
Introduisez le peptide RVG-9r, une glycoprotéine du virus de la rage attachée à une queue en polyarginine.
Les résidus d’arginine facilitent la liaison du RVG-9r-siRNA.
Injectez les complexes liposome-siRNA-peptide dans la veine de la queue d’une souris anesthésiée.
Les LSPC circulent dans la circulation sanguine et atteignent le cerveau.
Le peptide RVG-9r se lie aux récepteurs nicotiniques de l’acétylcholine sur les cellules endothéliales, déclenchant une transcytose médiée par les récepteurs à travers la barrière hémato-encéphalique.
À l’intérieur du cerveau, RVG-9r se lie aux récepteurs neuronaux de l’acétylcholine, facilitant l’endocytose du LSPC et la libération de siRNA.
Le complexe de silençage induit par l’ARN se lie à l’ARNsi.
Le brin passager se dissocie, tandis que le brin guide se lie à l’ARNm de la PrP et le clive, empêchant la traduction et réduisant l’expression de la PrP.
Ajoutez 20 microlitres de suspension de liposomes de 4 nanomoles à 200 microlitres d’une solution mère de siRNA de 20 micromolaires, et incubez pendant 10 minutes à température ambiante. Ajoutez ensuite 80 microlitres d’un stock de 500 micromolaires de peptide ciblant RVG-9r à la solution de liposomes siRNA et incubez pendant 10 minutes à température ambiante.
Après avoir anesthésié une souris à l’aide de 2 à 3 % d’isofluorane dans l’oxygène, couvrez les yeux de la souris avec une pommade ophtalmique et confirmez l’anesthésie en effectuant un pincement des orteils. Ne procédez que si une réaction est absente. Tout en maintenant l’anesthésie, placez la souris sur le dos ou sur le côté pour accéder à la veine de la queue.
Essuyez la queue avec de l’éthanol à 70 %, puis utilisez une seringue à insuline de calibre 26 pour injecter 300 microlitres de LSPC ou de PALETS dans la veine de la queue. Commencez l’injection distale et déplacez-vous vers la proximale si la veine s’affaisse ou se rompt. Placez la souris dans une cage propre jusqu’à ce qu’elle maintienne une décubitus sternal.