Transplantation de cellules précurseurs d’interneurones d’origine humaine dans l’hippocampe d’un bébé souris

Fixez un bébé souris génétiquement modifié anesthésié dans un cadre stéréotaxique à l’aide de barres auriculaires dans des directions opposées pour éviter les blessures.

L’hippocampe du chiot a des interneurones inhibiteurs réduits, ce qui entraîne une hyperexcitation des neurones excitateurs.

Maintenez une position de tête plate et couvrez le chiot de glace pour prolonger l’anesthésie.

Désinfectez le crâne et identifiez la suture lambda comme point de référence.

Positionnez l’aiguille d’injection aux coordonnées de l’hippocampe cible.

À l’aide d’une aiguille pliée, créez un trou de micro-entrée tout en minimisant les dommages au crâne.

Abaissez l’aiguille à la profondeur cible et injectez des cellules précurseurs d’interneurones d’origine humaine à un rythme contrôlé, minimisant ainsi les dommages tissulaires.

Rétractez lentement l’aiguille pour éviter le reflux cellulaire.

Retirez le chiot du cadre, réchauffez-le jusqu’à ce que le mouvement reprenne, puis remettez-le dans la litière dans la cage.

Les cellules précurseurs injectées se dispersent dans l’hippocampe, mûrissent et s’intègrent dans le réseau neuronal. Au fil du temps, ils améliorent la transmission inhibitrice, ce qui rétablit l’équilibre excitateur-inhibiteur.

Positionnez le chiot en le plaçant sur le cadre stéréotaxique et en utilisant les barres d’oreille dans la direction opposée. Ensuite, nettoyez la surface de la peau à l’aide d’un tissu mou imbibé d’éthanol. Identifiez lambda et réglez les coordonnées sur 0 sur la console d’affichage numérique de l’instrument stéréotaxique.

Après avoir déplacé la seringue Hamilton aux coordonnées souhaitées, utilisez une aiguille à insuline pliée à 90 degrés pour pénétrer dans le crâne, créant ainsi un petit trou. Descendez ensuite la seringue de Hamilton jusqu’à ce que l’aiguille traverse le crâne, et 0 la coordonnée dorso-ventrale.

Abaissez l’aiguille jusqu’à ce que les coordonnées dorso-ventrales souhaitées soient atteintes. Rétractez lentement l’aiguille une fois que les cellules souches ont été injectées. Terminez la procédure en réchauffant le chiot avec les mains jusqu’à ce qu’il commence à bouger avant de le rendre à la mère.