Injection de vecteurs adéno-associés recombinants dans un modèle murin d’atrophie musculaire spinale et bulbaire

Commencez par une atrophie musculaire spinale et bulbaire restreinte ou une souris affectée par la SBMA.

Nettoyez sa queue et réchauffez-la pour dilater la veine.

La SBMA est causée par un récepteur aux androgènes muté ou gène AR qui produit un AR AR mutant.

Cet ARNm synthétise des protéines toxiques dans les motoneurones qui altèrent la transmission du signal et entraînent une faiblesse musculaire.

Ensuite, prenez une seringue contenant des vecteurs de virus adéno-associés recombinants ou AAV avec un plasmide codant pour un microARN thérapeutique.

Insérez l’aiguille dans la veine de la queue et injectez la solution.

Maintenant, appliquez une pression pour arrêter le saignement, puis remettez la souris dans sa cage.

Une fois en circulation, le vecteur viral atteint les motoneurones qui contrôlent la fonction musculaire.

Le virus pénètre dans la cellule par endocytose, libérant le plasmide.

Le plasmide produit des microARN matures avec des séquences complémentaires à l’ARNm AR mutant.

Ces microARN se lient aux ARNm AR, déclenchant leur dégradation.

Cela inhibe l’accumulation de protéines toxiques et aide à améliorer la fonction neuromusculaire.

Divisez le stock de plasmides de microARN AAV en aliquotes de 100 à 200 microlitres, contenant une charge virale de 10 à 100 billions de génomes par millilitre. Ensuite, insérez une aliquote dans une seringue et fixez-y une aiguille de calibre 27 à 30.

Maintenant, à l’aide d’un dispositif de contention de souris standard, sécurisez une souris avec sa queue exposée. Nettoyez ensuite la queue avec de l’alcool à 70 % et placez un tampon chaud, sous la queue pendant environ 30 secondes pour augmenter la vasodilatation. Maintenant, au niveau de la partie distale de la queue, insérez l’aiguille dans la veine de la queue avec le biseau vers le haut et à un angle peu profond, environ 15 degrés.

Injectez ensuite le virus et attendez quelques secondes avant de retirer l’aiguille. Après avoir retiré l’aiguille, appliquez une pression modérée à l’aide de deux doigts pour arrêter tout saignement. Remettez ensuite l’animal dans sa cage d’origine.