JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 3:58 min • August 7th, 2025
Prenez un rat anesthésié avec des vertèbres exposées, avec les apophyses épineuses et les lames excisées des niveaux thoraciques T7 à T9.
Coupez les racines dorsale et ventrale au-dessus et en dessous de T8.
Appliquez une solution saline pour aider à arrêter le saignement et retirez le liquide à l’aide d’une éponge.
Transect de la moelle épinière entre T8 et T9 pour sectionner les fibres nerveuses.
Placez de la mousse compressée dans l’espace et appliquez une solution saline.
Une fois que le saignement cesse, retirez la mousse et éliminez le liquide résiduel.
Faites glisser un conduit en polymère piézoélectrique pré-préparé, avec les fenêtres ouvertes, sur le moignon de la moelle épinière rostrale.
Insérez le moignon caudal dans l’extrémité opposée du conduit.
Injectez des cellules de Schwann, suspendues dans une matrice injectable, à travers les fenêtres des conduits.
Fermez les fenêtres en toute sécurité.
Les cellules de Schwann peuplent le conduit et sécrètent des facteurs neurotrophiques qui favorisent la croissance des axones.
Le conduit fournit un guidage structurel, tandis que ses propriétés piézoélectriques génèrent des signaux bioélectriques pour la croissance des neurites.
Peu à peu, les axones se régénèrent à travers le pont, rétablissant la continuité entre les moignons.
Lorsque toutes les lames ont été enlevées, confirmez que les espaces entre les apophyses transverses sont visibles, en particulier en T8, et examinez les os des deux côtés entre T7 et T9 pour confirmer qu’il n’y a pas de fragments d’os saillants vers l’extérieur et que les racines dorsales devraient devenir visibles. À l’aide de ciseaux à ressort coudés, coupez les racines dorsale et ventrale au-dessus et en dessous de T8. Et ajoutez une solution saline à la moelle épinière pour aider à arrêter le saignement.
Ensuite, placez les ciseaux à ressort coudés au-dessus de la moelle épinière dans les espaces entre les apophyses transversales en T8, et faites une coupe pour sectionner complètement le tissu nerveux. Placez un petit morceau de mousse compressée dans l’espace de 2 à 2,5 millimètres résultant et ajoutez immédiatement une solution saline à la zone.
En attendant que les moignons du cordon sectionnés atteignent l’hémostase, coupez les triangles d’absorption en morceaux minces et longs et retirez un conduit de l’entreposage PBS. Placez quelques triangles dans le conduit pour éliminer l’excès de PBS et confirmez que les fenêtres prédécoupées sont ouvertes.
Ensuite, retirez le milieu d’une pastille de cellules de Schwann GFP et mettez les cellules de Schwann en suspension dans 10 microlitres de DMEM/F-12 froid. Ajoutez 10 microlitres de gel injectable froid à la suspension cellulaire et mélangez bien avec des pipetages répétés. Ensuite, placez la suspension cellulaire sur de la glace. Lorsque les moignons du cordon sont prêts, retirez la mousse compressée, puis utilisez de longs morceaux des triangles d’absorption pour retirer la solution saline et le sang de la zone de laminectomie.
Ensuite, à l’aide d’une micro spatule, soulevez doucement le moignon rostral et glissez le conduit sur le moignon avec les fenêtres vers le haut. Veiller à ce que toute la souche soit insérée et qu’il n’y ait pas de saignement excessif dans le conduit. Soulevez doucement le moignon caudal et glissez l’autre extrémité du conduit dessus. Veiller à ce que tout le moignon soit inséré et que les fenêtres soient sur la surface dorsale.
Ensuite, à l’aide d’une micropipette équipée d’un embout de chargement par Western blot, injectez 20 microlitres du mélange de matrice injectable à cellules GFP Schwann dans le conduit à travers l’une des fenêtres prédécoupées. Et fermez les fenêtres.