JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 2:11 min • August 7th, 2025
Commencez par un tube contenant une suspension d’exosomes, qui sont des nanovésicules extracellulaires à base de lipides.
Ajoutez une solution saline tamponnée au phosphate ou PBS dans le tube pour obtenir une dispersion uniforme des exosomes.
Aspirez la solution d’exosome et filtrez-la à l’aide d’un filtre à membrane pour éliminer les contaminants résiduels.
Transférez cette suspension d’exosome filtrée dans un tube frais.
Ajoutez une solution contenant de la dopamine, un agent neurothérapeutique, suivie de la saponine, un tensioactif, à la suspension d’exosomes.
Incuber le mélange à température physiologique pour améliorer la perméabilité de la membrane exosomale.
La saponine élimine sélectivement les cholestérols liés à la membrane de l’exosome, créant des pores dans les bicouches lipidiques exosomales.
La dopamine se diffuse à travers ces pores dans les exosomes.
Au fil du temps, les lipides de la membrane exosomale se redistribuent et les pores se ferment, encapsulant la dopamine dans les exosomes.
Ensuite, ultracentrifugez la solution de mélange pour granuler les exosomes chargés de dopamine.
Retirez le surnageant contenant de la dopamine libre et de la saponine.
La pastille contenant les exosomes chargés en dopamine est prête pour des études plus approfondies.
Ajoutez 3 millilitres de PBS à la suspension d’exosomes collectée plus tôt par ultracentrifugation, et stérilisez la suspension diluée par filtration à l’aide d’un filtre de 0,22 micron.
Transférez ensuite 500 microlitres de la suspension d’exosomes stérilisés dans un autre tube.
Ensuite, ajoutez séquentiellement 500 microlitres de solution de dopamine de 0,5 milligramme par millilitre et de la saponine dans la suspension stérilisée. Après l’incubation, ultracentrifugez la suspension.