Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:07 min • June 17th, 2025
Commencez avec des fibres musculaires murines fixées chimiquement et perméabilisées placées dans les puits d’une plaque multipuits.
Incuber dans une solution bloquante pour minimiser la liaison d’anticorps non spécifiques.
Ajouter des anticorps primaires ciblant une protéine présynaptique exprimée à la jonction neuromusculaire ou JNM.
Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés.
Incubez avec des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores ciblant les anticorps primaires, et une neurotoxine conjuguée aux fluorophores qui se lie aux récepteurs postsynaptiques de l’acétylcholine.
Laver avec un tampon pour éliminer les réactifs non liés.
Placez les fibres sur une glissière avec un support de montage, positionnez une lamelle et fixez-la à l’aide d’aimants cylindriques pour aplatir les fibres.
Commencez l’imagerie à l’aide d’un microscope confocal-STED.
Lors de l’éclairage laser, les protéines marquées deviennent fluorescentes.
La microscopie confocale ne parvient pas à résoudre les structures NMJ plus fines avec clarté en raison de sa résolution limitée et de sa propagation de fluorescence.
En revanche, la microscopie STED utilise un laser à déplétion pour supprimer la propagat
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