JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 2:41 min • June 17th, 2025
Commencez avec une souris anesthésiée avec un crâne exposé chirurgicalement positionné sous un macroscope à fluorescence.
La tête est stabilisée à l’aide d’une plaque de tête sur le crâne, créant ainsi une fenêtre crânienne.
Une canule contenant un traceur fluorescent est insérée dans la citerne magna, ou CM, du cerveau.
Le CM sert de réservoir pour le liquide céphalo-rachidien, ou LCR, qui circule dans l’espace sous-arachnoïdien entourant le cerveau.
À l’aide de la lumière visible, concentrez-vous sur le crâne.
Injectez le traceur fluorescent dans le CM, puis passez à l’imagerie par fluorescence.
Illuminez en utilisant une lumière d’une longueur d’onde spécifique pour exciter le traceur.
Le traceur absorbe cette lumière et émet des signaux fluorescents.
Les traceurs fluorescents se déplacent avec le LCR, ce qui permet de visualiser son flux à travers l’espace sous-arachnoïdien dans les espaces périvasculaires entourant les artères cérébrales et pénétrant
lesartérioles, pénétrant dans le tissu cérébral.
Capturez le signal fluorescent au fil du temps pour visualiser le flux de LCR.
Placez soigneusement la souris et la pompe à perfusion attachée à la canule sur un chariot pour le transport vers le macroscope, et placez le support de tête sur la platine du macroscope. Assurez-vous que la conduite entre le pousse-seringue et la canule Cisterna Magna n’est pas tendue et qu’elle n’a pas de plis. Observez la fréquence respiratoire et la coloration rose des muqueuses pour confirmer une bonne oxygénation.
Allumez la caméra du microscope et la diode électroluminescente et démarrez le mode en direct. Ajustez le grossissement du champ d’imagerie de manière à ce que la suture nasofrontale en haut du champ et la suture lambdoïde en bas puissent être clairement visualisées. Une fois en place, collez le support de tête sur la platine du macroscope et focalisez le macroscope sur le crâne exposé jusqu’à ce que le plan focal soit situé sur les côtés latéraux des os pariétaux, en arrière des sutures coronales.
Pour la perfusion d’un traceur de LCR, réglez la pompe à perfusion sur le débit et le volume appropriés, et réglez la longueur d’onde d’excitation et le temps d’exposition appropriés pour le traceur pour chaque canal. Vérifiez ensuite que la fonction de déclenchement sur le macroscope est correcte avant de lancer simultanément la perfusion du traceur et l’imagerie.