Transplantation transnasale de cellules microgliales humaines dérivées de cellules souches pluripotentes induites dans le cerveau de souris

Prenez une souris anesthésiée qui a été nourrie avec un régime contenant des inhibiteurs.

Dans le tissu cérébral, cet inhibiteur élimine sélectivement les cellules microgliales.

Appliquez une solution d’hyaluronidase sur les deux narines.

Placez brièvement la souris en position couchée pour éviter le drainage de la solution.

L’hyaluronidase décompose la matrice extracellulaire de la muqueuse nasale, relâche les cellules et améliore la pénétration des tissus.

Administrer une microglie humaine dérivée de cellules souches pluripotentes induites ou une suspension de cellules iPSMG dans une narine.

Placez la souris en position couchée. Ensuite, administrez la suspension dans l’autre narine.

Répétez l’administration plusieurs fois.

Les cellules iPSMG pénètrent dans la muqueuse nasale et suivent la voie olfactive pour atteindre le cerveau, contournant ainsi la barrière hémato-encéphalique.

Laissez la souris récupérer.

Anesthésie la souris et administre le milieu de transplantation par voie intranasale à intervalles réguliers.

Les facteurs de croissance dans les milieux favorisent la croissance et la survie des cellules iPSMG transplantées dans le cerveau de la souris.

Pour préparer les souris à la transplantation transnasale, nourrissez les souris mâles avec un régime contenant du PLX pendant sept jours. À la fin du septième jour, saisissez le régime PLX et nourrissez les souris avec un régime normal. Une heure avant la transplantation transnasale d’iPSMG, administrez deux fois 2,5 microlitres d’hyaluronidase dans du PBS dans chaque narine, à l’aide d’une pointe de pipette de 10 microlitres pour augmenter la perméabilité à la muqueuse nasale.

Placez les souris en position couchée après l’application de l’hyaluronidase. Administrer 2,5 microlitres d’hyaluronidase 10 minutes avant la transplantation transnasale d’iPSMG. Appliquez 2,5 microlitres de suspension cellulaire dans une narine de la souris à l’aide d’une pointe de pipette de 10 microlitres. Placez la souris en position couchée pendant cinq minutes avant d’administrer la suspension cellulaire à l’autre narine.

Administrer la suspension cellulaire quatre fois, en appliquant un volume total de 20 microlitres par animal. 48 heures après l’arrêt de l’alimentation PLX, répéter l’administration de hyaluronidase et de suspension cellulaire sur les mêmes souris. Pour l’administration de cytokines, appliquez 2,5 microlitres du milieu de transplantation dans une narine de la souris à l’aide d’une pointe de pipette de 10 microlitres.