Imagerie des tissus profonds du cerveau d’un poisson-zèbre à l’aide d’un microscope à fluorescence à trois photons

Placez une boîte de Pétri contenant un poisson-zèbre anesthésié avec un tube inséré dans sa bouche pour délivrer de l’eau oxygénée sous la lentille de l’objectif à faible grossissement du microscope à trois photons.

Le cerveau du poisson-zèbre contient des neurones génétiquement modifiés exprimant des protéines marquées par fluorescence pour la visualisation des tissus profonds pendant l’imagerie.

Illuminez l’antenne à l’aide d’une source lumineuse LED et ajustez les paramètres de visualisation pour plus de clarté d’image.

Abaissez la lentille de l’objectif jusqu’à ce que le poisson-zèbre soit visible, en centrant sa tête dans le champ de vision.

Remplacez l’objectif à faible grossissement par un objectif à haute résolution pour l’imagerie à trois photons.

Abaissez soigneusement l’objectif jusqu’à ce que la tête soit visible sans contact physique et réglez les valeurs de l’axe à zéro.

Éteignez la source lumineuse LED et fermez le rideau sombre pour minimiser le bruit de fond.

Réglez les paramètres d’imagerie et effectuez une imagerie à trois photons, où des longueurs d’onde plus longues permettent une excitation à trois photons dans les tissus profonds.

Lors de l’excitation, les fluorophor