Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:07 min • June 17th, 2025
Commencez par une tranche de tissu de glioblastome obtenue à partir d’une tumeur excisée chirurgicalement.
Conservez la tranche de tissu dans un milieu de culture pour favoriser la survie cellulaire.
Les cellules tumorales à l’intérieur de la tranche expriment une protéine fluorescente verte, ou GFP, qui facilite la visualisation des cellules tumorales pendant la migration cellulaire.
Placez la plaque de culture contenant les tranches de tissu sur la platine du microscope confocal.
Placez un incubateur sur la scène pour maintenir la température du fluide.
Sélectionnez un objectif et visualisez les cultures de coupes au microscope.
Les microscopes utilisent la lumière laser pour exciter les protéines fluorescentes dans les cellules.
Maintenant, scannez l’échantillon couche par couche pour capturer des images à différentes profondeurs.
Empilez les images pour créer une représentation 3D détaillée des cellules.
Ensuite, capturez des images Z-stack à intervalles réguliers pour suivre le mouvement et la direction des cellules, ce qui permet d’étudier la migration des cellules tumorales au fil du temps.
Placez la parabole dans un incubateur de microscope scellé à 37 degrés, 5 % de CO2, sur le dessus d’un microscope confocal. Utilisez un objectif aérien 10x à longue distance de travail associé à l’imagerie à un ou plusieurs photons pour capturer des images tridimensionnelles et résolues dans le temps de la migration cellulaire. Visualisez la coupe au microscope, en localisant un champ approprié avec une densité adéquate de cellules tumorales marquées par fluorescence entre le bord de la tranche et le centre du tissu. Ensuite, dans le mode d’analyse multidimensionnelle du logiciel d’imagerie, réglez le centre de l’empilement z de sorte que toutes les positions à imager contiennent un signal cellulaire fluorescent visible. Et fixez un temps adéquat pour chaque acquisition de la pile z.