Imagerie calcique spontanée pour la dynamique spécifique des compartiments dans les astrocytes

Prenez une lamelle recouverte de polymère contenant une culture mixte neurone-astrocyte dans la chambre d’enregistrement.

Ces cellules transfectées expriment des protéines sensibles au calcium sur les membranes plasmiques et RE, fluorescentes lors de la liaison au calcium pour suivre la dynamique subcellulaire du calcium.

Ajoutez un fluide contenant des ions calcium et couvrez la chambre pour éviter l’évaporation.

Placez la chambre sous un microscope à fluorescence.

Les ions calcium se lient aux protéines sensibles au calcium. Lors de l’irradiation à la lumière bleue, les protéines sensibles au calcium sur la membrane externe du RE deviennent vertes fluorescentes. Utilisez cette fluorescence verte pour localiser les astrocytes.

Ensuite, irradiez avec de la lumière verte. Les protéines sensibles au calcium sur la membrane plasmique deviennent fluorescentes. Confirmez la présence d’une fluorescence rouge dans le même astrocyte présentant une fluorescence verte.

Enregistrez des images en accéléré des protéines sensibles au calcium sur la membrane plasmique, suivies des protéines sensibles au calcium sur la membrane externe du RE.

Analysez les images pour observer l’activité calcique spontané