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Neurosciences
0 vues • 3:29 min • August 7th, 2025
Commençons par un rat anesthésié positionné sur le côté avec la queue exposée.
Localisez la veine latérale de la queue, identifiez un site d’injection sur sa longueur et désinfectez la zone.
Appliquez une légère pression au-dessus du site d’injection pour dilater la veine.
Prenez une seringue contenant le virus adéno-associé recombinant ou le vecteur AAV porteur du gène cible.
Alignez l’aiguille avec la veine et percez la peau de la queue.
Relâchez la pression sur la veine pour rétablir une circulation sanguine normale.
Insérez l’aiguille dans la veine de la queue et injectez lentement le virus.
Après l’injection, retirez l’aiguille, appliquez une pression pour arrêter tout saignement et surveillez le rétablissement du rat.
La veine latérale de la queue libère le virus dans la circulation sanguine, où il circule dans le cœur et pénètre dans le cerveau, atteignant les neurones.
À l’intérieur du neurone, le virus pénètre dans le noyau, libère son matériel génétique et facilite la production de protéines cibles pour des applications neurothérapeutiques.
Anesthésie correctement le rat à l’aide du système d’anesthésie. Assurez-vous d’un plan d’anesthésie adéquat en l’absence de réaction à un pincement de l’orteil. Ensuite, placez le rat dans la zone de travail sur le côté et maintenez l’anesthésie à l’aide du cône nasal. Avec le rat couché sur le côté, une veine latérale de la queue doit être tournée vers le haut.
Le site d’injection se trouve aux deux tiers de la longueur de la queue. Essuyez le site d’injection avec le tampon de préparation d’alcool. Tenez fermement la queue légèrement au-dessus de la zone d’injection avec un doigt directement sur la veine latérale de la queue. Cela dilatera la veine. Avec le biseau vers le haut, alignez l’aiguille avec la veine visible de la queue dans la même direction.
Percez la peau de la veine de la queue en prenant grand soin d’éviter que l’autre main ne tienne la queue et n’appuie sur la veine de la queue. Relâchez la pression de la veine de la queue pour permettre une circulation sanguine normale. Déplacez ensuite l’aiguille dans la veine. Pour vous assurer que l’aiguille a perforé la veine de la queue, tirez légèrement sur le piston. Si l’aiguille est dans la veine, le sang coulera dans l’aiguille.
Après avoir repositionné l’aiguille, si nécessaire, stabilisez l’aiguille en tenant l’extrémité de la seringue contre la queue. Injectez lentement le vecteur dans la queue à environ 20 microlitres par seconde.
Dans le cas d’une mauvaise injection, l’animal ne sera que partiellement transduit et les résultats ne seront probablement pas utiles. Cependant, avec de la pratique, les bonnes injections sont très reproductibles et fiables.
Si le vecteur a été administré, retirez l’aiguille de la queue et appuyez un tampon de gaze contre le site d’injection pour aider à arrêter le saignement pendant 30 à 60 secondes. Désactivez l’anesthésie à l’isoflurane et l’oxygène. Surveillez le rat jusqu’à ce qu’il reprenne conscience, puis renvoyez-le dans sa cage. Jetez les matériaux susceptibles d’être contaminés par l’AAV dans un contenant approprié pour les produits à risque biologique et nettoyez le poste de travail avec de l’éthanol à 70 %.